姜油树脂通过Nrf2通路介导的抗氧化活性研究

• 作 者: 李晴
• 机 构: 北京协和医学院
• 出 处: 北京协和医学院中国医学科学院 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
• 发表日期: 2016年期
• 关键词: 辐射损伤 间充质干细胞 姜油树脂 Nrf2通路 抗氧化活性

目的:通过体外实验观察姜油树脂通过Nrf2通路对间充质干细胞的抗氧化作用，并初步探讨其作用机制。　　方法:(1)取对数生长期人源间充质干细胞，分为对照组(Ctrl)、姜油树脂单独处理组(GO)、γ射线照射组（IR)、姜油树脂联合照射组（以下简为联合组，IR+GO）。MTT法检测姜油树脂对间充质干细胞的毒性;流式细胞术检测姜油树脂联合照射对细胞活性氧(ROS)的影响;彗星实验观察姜油树脂联合照射对细胞内DNA双链断裂的作用。(2)Western blot和RT-PCR观察Nrf2、HO1、NQO1蛋白表达变化和mRNA水平的变化。(3)免疫荧光、Western blot观察Nrf2蛋白的核转位情况。(4)siRNA干扰Nrf2之后观察不同组间Nrf2、HO1、NQO1的mRNA及蛋白的表达变化。　　结果:(1)不同浓度的姜油树脂对间充质干细胞的影响不同:和对照组相比，高于10-4 g/mL姜油树脂对MSCs的生长有非常明显的抑制作用（p＜0.01）。而10-6、10-5、10-4 g/mL姜油树脂对间充质干细胞几乎没有细胞毒性(p＞0.05）。4Gyγ射线照射后24h，联合组的活性氧水平及DNA损伤水平比单纯照射组低(p＜0.05)。　　(2)间充质干细胞在4个分组中的Nrf2基因的mRNA水平变化不是很明显，但是姜油树脂联合照射组中其下游的HO1、NQO1的mRNA表达水平高于单纯加入姜油树脂组和照射组，差异具有统计学意义(p＜0.05），蛋白水平也是如此。　　(3)免疫荧光及Western blot结果显示Nrf2蛋白发生了核转位。(4)将Nrf2干扰之后，照射组、姜油树脂联合照射组中的Nrf2的mRNA与蛋白发生了不同程度的下降。　　结论:姜油树脂能降低辐射所诱发的活性氧水平，能减少辐射所造成的DNA损伤，并能明显提高发挥抗氧化作用的抗氧化酶、Ⅱ相解毒酶的mRNA及蛋白表达水平。但是其本身的表达并没有发生很大变化，提示姜油树脂可以通过降低辐射诱发的氧化损伤发挥抗氧化作用，其作用机制与Nrf2发生核转位有关。同时将Nrf2干扰之后，姜油树脂并没有提高其下游的靶基因的转录及翻译水平，提示姜油树脂是通过Nrf2通路来发挥作用的。