非洲爪蟾卵母细胞P2X受体存在的证明

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非洲爪蟾卵母细胞的内源性ATP-激活膜电流(I<,ATP>)包括有三个成分:1)最先出现的为快内向电流Dl成分[I<,ATP (D1>)];2)继后为较慢的内向电流D2成分[I<,ATP(D2)>];3)再后为-缓慢的外向电流H成分[I<,ATP (H)>].该研究的目的在于进一步证实D1电流中是否有P2X受体介导电流的存在,以及共存的P2X和P2Y受体之间是否存在有相互作用.采用双电极电压钳记录方法实验结果:(1)带滤泡膜的卵母细胞所记录之ATP引起的膜电流反应:诸成分的发生率(inci dence)为:D1(25/320,7.8%);D2(110/320,34.4%);D1>D2(10/320,3.1%);D1=D2(146/320,45.7%);Dl]和[I<,ATP (D2>)]的阻断作用:胞内注入GDP-β-S(一种非水解的GDP类似物)到具有D1和D2电流成分的细胞进行透析,可见D1和D2电流成分均随时间而逐步减小.到达50min时,D2电流已减小90%以上,而D1的减小仅为40%左右,二者的差别非常明显;(3)Zn<2+>对不依赖于G蛋白之I<,ATP (D1)>具有增强作用;(4)重复施加ATP对I<,ATP(D1)>和I<,ATP(D2)>的影响:Dl电流逐步减小,而D2电流则逐步增大.在仅有D2之I<,ATP(D2)>情况下,重复加ATP后D2电流不但不增大反而有所下降;(5)Ca<2+>在P2X和P2Y相互影响中的作用:以无钙的任氏灌流液作为对照组,胞外重复加ATP,对照组未出现D1幅值逐渐减小、D2幅值明显增加的现象.结论:非洲爪蟾卵母细胞上存在P2X受体
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