李核微卫星引物开发和种质资源聚类分析

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微卫星(simple sequence repeat或microsatellite,简称SSR),是一种新的DNA标记方法,因其具有保守性、高多态性、共显性等特点深受广大研究者的青睐。基于微卫星研究在李上仍然有待加强,本文进行了以下三个方面的研究: 1.本研究采用简化的链亲和素磁珠富集法、ISSR巢式PCR法和改进的选择性扩增微卫星(SAM)法分离了中国李的微卫星序列共61条,并在GenBank上登录22条。根据这些微一卫星序列用Primer5.0设计了38对微卫星引物,用于扩增微卫星区域。微卫星引物的多态性检测在包括‘小黄李’在内的李的5个种质材料上进行,有28对微卫星引物能够扩增出具多态性的PCR产物。 2.以SSR标记和基于微卫星的SSAP标记两种方法对31份李种质进行了聚类分析,结果发现SSR标记虽然可以将31份李种质中的4个欧洲李聚到一个组,但是其间也混杂了其他种质;而基于SSR的SSAP标记则可以将4个欧洲李单独聚到一个组,聚类效果优于SSR标记。 3.提出了一种基于SSAP技术的微卫星标记开发新策略:利用具有高多态信息含量,基于复合重复类型微卫星的SSAP分子标记技术寻找不同品种或种群间的差异片段,电泳后从聚丙烯酰胺凝胶上回收差异片段条带,将之转化为SCAR标记,测序后设计一条引物与复合重复类型微卫星引物配对使用,即可将其转化为微卫星特异标记。本策略已通过从小黄李中分离的1条与盖县大李的差异片段,成功地转化为区分这两个品种的特异微卫星标记,获得初步验证。
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