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目的:1.筛选Mtb的PPE68基因中有效的抗原肽（简称PPE68肽）,构建带有PPE68肽的真核质粒p BudCE4.1-PPE68肽,以沙门菌为载体,灌胃免疫BALB/c小鼠,观察PPE68及PPE68肽的免疫原性差异。2.构建Zmp1与PPE68或PPE68肽的共表达质粒pBud CE4.1-PPE68-Zmp1和pBudCE4.1-PPE68肽-Zmp1,以沙门菌为载体,灌胃免疫BALB/c小鼠,探讨Zmp1对PPE68及PPE68肽的免疫原性的影响。方法:1.在GenBank查找PPE68基因序列（NC000962）和抗原蛋白编码序列,经在线抗原肽分析软件（http://www.cbs.dtu.dk/Services/BepiPre d/）筛查T细胞抗原表位,合成编码抗原肽的编码序列,构建pBud CE4.1-PPE68肽表达质粒。2.将pBudCE4.1-PPE68和pBudCE4.1-PPE68肽重组质粒电转入减毒沙门菌SL7207中,通过PCR鉴定重组沙门菌;用鉴定正确的重组沙门菌口服免疫BALB/c小鼠,检测脾淋巴细胞增殖情况、血清IL-12与IFN-γ水平,肠及肺粘膜sIgA产生来了解PPE68及PPE68抗原肽的免疫原性。3.将zmp1基因插入到pbudce4.1-ppe68和pbudce4.1-ppe68肽质粒另一个多克隆位点,构建pbudce4.1-ppe68-zmp1和pbudce4.1-ppe68肽-zmp1质粒,并将其转染raw264.7细胞,实时定量pcr（qrt-pcr）检测zmp1基因mrna的表达水平。4.将pbudce4.1-ppe68-zmp1和pbudce4.1-ppe68肽-zmp1质粒电转入减毒沙门菌sl7207,构建重组沙门菌,口服免疫balb/c小鼠,检测脾淋巴细胞增殖情况、血清il-12与ifn-γ水平,肠及肺粘膜siga产生来探讨zmp1对ppe68或ppe68抗原肽免疫原性的影响。结果:1.筛选出ppe68抗原肽,成功构建重组质粒pbudce4.1-ppe68肽经pcr鉴定正确,dna测序结果完全正确。2.重组质粒pbudce4.1-ppe68和pbudce4.1-ppe68肽电转入减毒沙门菌,经pcr鉴定,成功构建重组沙门菌。3.末次免疫小鼠后,elisa法检测血清中il-12和ifn-γ。ppe68组与ppe68肽组il-12和ifn-γ均高于对照组（p<0.05）,ppe68肽组高于ppe68组（p<0.05）;与对照组相比,ppe68组与ppe68肽组特异性脾淋巴细胞增殖均有显著性差异（p<0.05）;与对照组相比,ppe68组与ppe68肽组的小肠灌洗液和肺灌洗液中siga升高水平有显著性差异（p<0.05）,但ppe68组与ppe68肽组间无明显差异（p>0.05）。4.成功构建质粒pbudce4.1-ppe68-zmp1和pbudce4.1-ppe68肽-zmp1,重组质粒经酶切,出现条带与理论值相符合,dna双向测序结果与genbank中录注的序列相同;qrt-pcr检测到zmp1基因在巨噬细胞raw264.7内mrna表达。5.重组质粒pbudce4.1-ppe68-zmp1和pbudce4.1-ppe68肽-zmp1电转入沙门菌,经pcr鉴定,成功构建了重组沙门菌。6.口服免疫小鼠,elisa检测血清中il-12和ifn-γ。血清中il-12的水平ppe68组和ppe68/zmp1组相比较有差异（p<0.05）,ppe68肽组和ppe68肽/zmp1组相比较有显著性差异（p<0.05）。血清中inf-γ的水平ppe68组和ppe68/zmp1组相比较有显著性差异（p<0.05）,ppe68肽组和ppe68肽/zmp1组相比较无显著性差异（p>0.05）。小肠灌洗液中siga的水平ppe68组和ppe68/zmp1组相比较有差异,（p<0.05）;ppe68肽组和ppe68肽/zmp1组相比较无显著性差异（p>0.05）。肺灌洗液中siga的水平ppe68组和ppe68/zmp1组相比较有差异,但无统计学意义（p>0.05）;ppe68肽组和ppe68肽/zmp1组相比较无显著性差异（p>0.05）。脾淋巴细胞增殖实验组与对照组比有显著性差异（p<0.05）,但实验组间无显著性差异（p>0.05）。结论:1.经减毒沙门菌携带,ppe68和ppe68抗原肽均能诱导明显的免疫应答;采用ppe68抗原肽免疫效果优于ppe68蛋白。2.经减毒沙门菌携带,zmp1可抑制ppe68在体内消化处理,影响炎性趋化因子分泌,影响机体免疫反应;但zmp1对ppe68抗原肽的免疫影响不明显。3.经减毒沙门菌携带,ppe68和ppe68抗原肽均能诱导明显的粘膜免疫应答,Zmp1对粘膜免疫应答会产生一定的影响。