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结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病。结核菌可侵入人体全身各个器官,其中80%发生在肺部,其他部位(颈淋巴、脑膜、腹膜、肠、皮肤、骨骼)也可继发感染。15岁到35岁是结核病的高发年龄段。该病的病理特点是结核结节和干酪样坏死形成,并容易形成空洞。临床上结核病除少数可急起发病外,多呈慢性过程,常有低热、乏力等全身症状和咳嗽、咯血等呼吸系统表现。研究发现,相当一部分肺结核患者在初诊时合并有不同程度的血小板减少,这一临床表现使得抗结核治疗变得棘手,因为很多抗结核药物都会引起血小板减少。所以对于伴有血小板减少的肺结核患者进行抗结核治疗时尤其要重视血小板减少这一临床表现,以免引起致命的出血。然而肺结核合并血小板减少的机制到目前为止尚不清楚。本论文观察了合并血小板减少的肺结核患者网织血小板、血浆促血小板生成素以及血小板的氧化应激等情况,旨在探讨肺结核患者发生血小板减少的可能机制。 【目的】 观察合并血小板减少的肺结核患者网织血小板、血浆促血小板生成素以及血小板的氧化应激情况,探讨肺结核患者合并血小板减少的可能机制。 【方法】 选取2010年至2013年间在汕头市第三人民医院确诊的初治肺结核患者40例(男性27例,女性13例),年龄18~54岁。其中初治时合并血小板减少者20例(男性14例,女性6例),年龄18~52岁,外周静脉血的血小板计数为(20~50)?109/L;血小板正常者20例(男性13例,女性7例),年龄21~54岁,外周静脉血的血小板计数为(100~300)?109/L。汕头大学医学院第二附属医院体检健康对照者20例(男性14例,女性6例),年龄23~57岁,外周静脉血的血小板计数为(100~300)?109/L。 1.血小板和血浆的分离 采用梯度离心法分离血小板和乏血小板血浆(platelet poor plasma,PPP)。 2.网织血小板的检测 采用流式细胞学方法检测外周静脉血的血小板中网织血小板(reticulated platelet,RP)的比例。 3.血浆促血小板生成素的检测 采用双抗体夹心酶标免疫分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血浆中的促血小板生成素(thrombopoietin,TPO)含量。 4.血小板内活性氧簇的检测 采用流式细胞学方法检测血小板内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的表达。 5.血小板蛋白质的提取 采用裂解血小板的方法提取血小板的蛋白质。 6.血小板内丙二醛、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化酶的检测 提取血小板蛋白质,采用比色法检测血小板内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase, GSH-PX)的含量。 【结果】 1.网织血小板的比例 流式细胞学检测发现,合并血小板减少的肺结核患者的网织血小板比例为(18.65±2.72)%,明显多于血小板计数正常的肺结核患者[(2.89±0.98)%]和健康对照者[(2.71±0.69)%](P<0.01),血小板计数正常的肺结核患者的网织血小板比例和健康对照者无统计学差异。 2.血浆TPO的含量 双抗体夹心 ELISA检测发现,合并血小板减少的肺结核患者血浆中TPO的含量为(128.3±21.8) pg/mL,明显多于血小板计数正常的肺结核患者[(79.5±8.3) pg/mL]和健康对照者[(81.2±10.7) pg/mL](P<0.01),血小板计数正常的肺结核患者血浆中TPO的含量和健康对照者无统计学差异。 3.血小板内ROS的水平 流式细胞学检测显示合并血小板减少的肺结核患者血小板内反映 ROS的二氯荧光素(dichlorofluorescin,DCF)的平均荧光强度(mean flourscence indensity,MFI)为(54.2±4.3),明显多于未合并血小板减少的肺结核患者(3.2±0.8)和健康对照者(3.6±0.5)(P<0.01),未合并血小板减少的肺结核患者血小板内DCF的MFI与健康对照者无统计学差异。 4.血小板内MDA的含量 合并血小板减少的肺结核患者血小板内 MDA的含量[(27.16±3.34)μmol/mg?pro]明显高于未合并血小板减少的肺结核患者[(9.13±1.71)μmol/mg·pro]和健康对照者[(9.04±2.05)μmol/mg?pro](P<0.01),而未合并血小板减少的肺结核患者血小板内MDA的含量与健康对照者无统计学差异。 5.血小板内SOD的含量 合并血小板减少的肺结核患者血小板内 SOD含量[(113.15±25.88) U/mg?pro]显著低于未合并血小板减少的肺结核患者[(218.52±18.31) U/mg··pro]和健康对照者[(221.13±11.86) U/mg··pro](P<0.01),而未合并血小板减少的肺结核患者血小板内SOD的含量与健康对照者无统计学差异。 6.血小板内GSH-PX的含量 合并血小板减少的肺结核患者血小板内GSH-PX的含量[(1159.45±123.54)U/mg·pro]明显少于未合并血小板减少的肺结核患者[(1812.59±271.28)U/mg·pro]和健康对照者[(1799.22±247.85)U/mg·pro](P<0.01),而未合并血小板减少的肺结核患者血小板内GSH-PX的含量与健康对照者无统计学差异。 【结论】 合并血小板减少的肺结核患者外周血中的网织血小板比例和TPO含量呈代偿性增多,其血小板处于氧化应激和过氧化损伤的状态。血小板由于氧化应激和过氧化损伤而被破坏可能是肺结核患者合并血小板减少的原因。