【摘 要】
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该文根据国外已发表有番鸭细小病毒(MPV)FM株基因组核苷酸序列设计并合成了一对引物(P1和P2),对番鸭细小病毒国内分离株杨州株(MPV YZ株)和佛山株(MPV FS株)主要结构蛋白(VP2
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该文根据国外已发表有番鸭细小病毒(MPV)FM株基因组核苷酸序列设计并合成了一对引物(P1和P2),对番鸭细小病毒国内分离株杨州株(MPV YZ株)和佛山株(MPV FS株)主要结构蛋白(VP2-VP3)基因进行PCR扩增,获得的PCR产物与预期片段大小相等,约为1.8kb.将该片段直接克隆到pCR3.1T载体中,经快速鉴定、PCR鉴定和BamH I、Xba I、Kpn I酶切分析,筛选出正向和反向连接的重组质粒为pMVPY1、pMVPF1和pMVPY2、pMVPF2,将正向连接的重组质粒进行核苷酸序列测定,并用DNASTAR软件进行核苷酸和氨基酸序列分析比较.重组质粒pMVPF1用BamH I和Xhol I双酶切后,将MPV FS株的VP2-VP3基因定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点.经BamH I、BamH I/Xho I、BamH I/EcoR V酶切鉴定,证实成功地构建了表达VP2-VP3基因的原核表达质粒pEMVP,再将pEMVP转化到表达菌BL21中,经IPTG诱导,通过SDS-PAGE电泳分析和Western-Blot对表达产物进行检测,结果表明:SDS-PAGE电泳获得两条大小约为72kD和60kD的蛋白带.Western-Blot检测有特异性反应条带,证明表达产物具有一定的反应原性.
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