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目的:
通过小细胞肺癌细胞(NCI-H446)的干细胞特性、致瘤性和多向分化潜能进行体内外研究，揭示小细胞肺癌的细胞生物学特性;探讨小细胞肺癌细胞的诱导分化机制;展望诱导分化治疗小细胞肺癌的临床应用前景。
方法:
1.传代培养NCI-H446细胞至第三代后，接种于经层黏连蛋白处理的圆玻片上贴附生长，固定后免疫荧光染色，观察细胞是否具有干细胞的特异性标记物;.
2.分别利用普通贴壁生长和软琼脂构建的锚定非依赖性生长的培养条件，检测NCI-H446细胞在不同环境下的增殖和克隆形成能力;
3.将NCI-H446细胞注入免疫缺陷的裸鼠皮下与原位构建移植瘤模型，并检测其干细胞标记蛋白及增殖相关蛋白在肿瘤细胞内的表达;
4.NCI-H446细胞经曲古抑菌素A(TSA)，成骨细胞和脂肪细胞诱导培养基分别诱导分化后检测:肿瘤细胞向神经细胞、成骨细胞和脂肪细胞的分化成熟程度;免疫印迹测定上述相关成熟细胞的标志蛋白及凋亡、自噬、增殖相关蛋白表达差异;TUNEL法计数凋亡细胞;
5.构建NCI-H446细胞的皮下移植瘤模型，采用诱导成骨细胞培养基局部注射进行诱导治疗，分析体内诱导分化治疗的可行性。
结果:
1.多数NCI-H446细胞能够表达多种干细胞表面标记物。免疫荧光结果包括:肿瘤干细胞标记物(CD133)，多能干细胞标记物(Sall4、Oct4)，神经嵴干细胞标记物(Nestin)，神经细胞黏附分子(NCAM)，神经胶质细胞标记物(S100β)，间充质干细胞标记物(Vimentin、CD44、CD105)。
2.多数NCI-H446细胞在贴壁或者锚定非依赖性生长的培养条件下均能克隆增殖。在单细胞贴壁克隆增殖实验中，初级克隆形成率为95％(54/57)，而初级克隆形成的子代克隆形成率达到100％(55/55)。在由软琼脂形成的锚定非依赖性环境里，多数细胞也都能形成克隆。
3.NCI-H446细胞具有稳定的致瘤性。NCI-H446细胞可以在裸鼠皮下形成移植瘤，也可在肺部形成原位移植瘤;细胞种于皮下和肺内均是先形成癌巢，再逐渐形成实体瘤。瘤体细胞能表达多种干细胞标记物，转录因子标记物和细胞增殖核抗原(Ki67)。
4.经曲古抑菌素A(TSA)诱导后，NCI-H446细胞可分化成神经细胞。免疫荧光和Westenblotting的结果表明，诱导后神经细胞标志物有所表达，自噬与凋亡相关蛋白表达增高，而增殖相关蛋白表达下降。
5.NCI-H446细胞可分化成脂肪细胞。经脂肪细胞诱导和维持培养基处理三个周期后，油红染色可见细胞内积成大量脂滴;Westernblotting结果表明脂肪细胞相关蛋白大量表达。
6.NCI-H446细胞可以成骨细胞转化。茜素红染色与Westernblotting结果显示Sirt1/2通路的抑制剂能够抑制成骨，而激动剂则促进成骨;表明Sirt1/2通路与成骨诱导相关;诱导作用下，骨细胞相关蛋白表达，而自噬与凋亡蛋白也随之升高。
7.裸鼠体内皮下移植瘤能够在成骨诱导处理下停止增长和钙化。利用成骨诱导剂对皮下移植瘤持续处理4周，钼靶X线的结果表明:对照组瘤体生长较快，组成均一;而诱导处理组瘤体较小，中心出现钙化。
结论:
小细胞肺癌(NCI-H446)细胞能表达出神经外胚层与中胚层干细胞的特征。具有干细胞特性、强致瘤和可塑性，可被诱导终末分化且出现自噬、凋亡。结果表明，诱导分化治疗对于小细胞肺癌是一种潜在的、有效的治疗方法，具有低全身毒性和靶向作用于肿瘤干细胞等特点。