【摘 要】
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人的胰岛素样生长因子-Ⅰ是存在于人体多种组织中的具有多种重要生理功能的细胞因子。它的缺乏会导致多种严重的疾病。因而它也成为具有多种治疗用途的药物。本研究目的是利
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人的胰岛素样生长因子-Ⅰ是存在于人体多种组织中的具有多种重要生理功能的细胞因子。它的缺乏会导致多种严重的疾病。因而它也成为具有多种治疗用途的药物。本研究目的是利用毕赤酵母表达系统高效地表达这种蛋白。
本研究利用PCR引入突变的方法成功地改造胰岛素样生长因子-Ⅰ的基因序列以满足毕赤酵母对密码子的偏好性，以期提高其在毕赤酵母表达系统中的表达水平。成功地将改造过的人胰岛素样生长因子基因定向克隆到毕赤酵母表达载体上。把构建好的表达载体转入巴斯德毕赤酵母中，经历组氨酸缺陷培养基的筛选和含有不同浓度G418的培养基的多次筛选，获得9个能在含5.0mg/mlG418YPD培养基上生长克隆。PCR鉴定表明：胰岛素样生长因子Ⅰ基因已经成功地整合进入毕赤酵母GS115的基因组中。挑选其中的1个克隆在恒温振荡器实行诱导表达。分别在第48、72、96、120小时取上清，用硫酸铵沉淀蛋白。经过SDS-PAGE电泳显示：表达的外源蛋白与目标蛋白大小一致。Westernbloting表明它就是我们所要表达的目标蛋白。经测定，96小时的培养上清中目标蛋白的表达量约为400mg/L，约占培养上清总蛋白的50％。
我们的工作为进一步筛选更高表达菌株，活性的测试，以及临床应用打下一定的基础。
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