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藏药“解吉”常用于治疗赤巴病等疾患。在传统藏医药学中,“解吉”分黑、白2个品种,白的称“解吉嘎保”,黑的称“解吉那保”。 “解吉嘎保”为多来源品种,涉及龙胆科5种植物。目前尚未见“解吉嘎保”的藏药质量标准,为确保该品种临床用药的安全性与有效性,课题组在前期工作基础上,对“解吉嘎保”开展深入研究工作,以期为该品种的系统整理及质量标准的制定提供基础资料。本文是“解吉嘎保”生药学研究的阶段性工作之一:其中麻花艽GentianastramineaMaxim.,粗壮秦艽G.robustaKingexHook.f.2种原植物的生药学研究。具体研究工作如下: 1.生药学研究 1.1野外考察与原植物分类学鉴定 通过实地考察与标本采集,对粗壮秦艽的生长环境,植株形态特征,种内个体变化幅度等有了深刻印象与感悟,为后续的室内标本分类学鉴定工作打下坚实基础。 对采自西藏拉萨和山南地区的“解吉嘎保”基源植物及采自四川省阿坝藏族羌族自治州若尔盖县的“解吉嘎保”基源植物进行分类学鉴定,确定为龙胆科龙胆属秦艽组(Sect.CruciataGaudin)植物粗壮秦艽GentianarobustaKingexHook.f.,麻花艽G.stramineaMaxim.。 1.2药材特征 粗壮秦艽的根较麻花艽更粗壮,其表面密布斜向细长孔沟,麻花艽无此性状。根部形态特征鉴别意义有限。 1.3显微特征 两者根的横切面,均可见颓废组织、栓化细胞层、韧皮部、形成层和木质部;栓化细胞层均由三层细胞构成,形成层均不明显,裂分不易观察。麻花艽栓化细胞层外颓废组织相对明显。 两者粉末都含有木栓细胞、导管和纤维。粉末特征鉴别意义有限。 2.品质评价 2.1西藏拉萨、山南地区粗壮秦艽的品质评价 通过考察粗壮秦艽色谱条件,首次建立了该品种龙胆苦苷的含量测定方法。色谱条件:UltimateXB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液(13:87),柱温25℃,体积流量1.0mL/min,检测波长为254nm。龙胆苦苷与其他成分分离度良好,在1.56-25μg范围内线性良好,得到了线性回归曲线: y=11162x+77.203,R=0.9998加样回收率在95.2%-101.4%范围内;运用所建立的方法对三批粗壮秦艽样品进行含量测定。该方法准确、稳定,为建立粗壮秦艽的用药质量标准提供了基础资料。 2.2四川若尔盖县麻花艽的品质评价 以龙胆苦苷为内参照物,分析10批麻花艽药材的HPLC色谱行为,同时以当地产近缘种黄管秦艽G.officinalisH.Smith及国家药典品种粗茎秦艽G。crassicaulisDuthieexBurk.为外类群进行比对。优化并建立色谱条件如下:UlfimateXB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-0.02%乙酸水梯度洗脱;体积流量:1.0mL/min;检测波长:240nm;柱温:30℃;进样量:10μL。结果标定出麻花艽16个共有峰,并确定其中2个峰的归属,最终建立了麻花艽指纹图谱。该图谱基本反映了四川若尔盖县产麻花艽化学背景特征,可为道地药材评价及相关中药、藏药品种鉴定提供基础资料。同时该图谱与外类群图谱进行比对,可以找到明显区分的特征峰。 测定麻花艽根、茎叶、花三个不同药用部位中龙胆苦苷和马钱苷酸的含量,结果显示该品种地上部分与地下部分两种成分的含量都较高,基本都能达到2010版药典秦艽药材的限量标准。为解吉的用药习惯提供了科学依据。 3.基于ITS区的粗壮秦艽barcoding研究 对不同居群粗壮秦艽样品中nrDNAITS区序列进行初步研究,首次报道杂合片段,并通过设计特异性新引物GSO,成功将杂合片段分离,获得清晰的目的片段及序列,该片段可作为秦艽组一个新的barcoding鉴别序列。