论文部分内容阅读
δ地中海贫血是δ球蛋白链合成受抑制的一类遗传性疾病。控制δ球蛋白链合成的δ球蛋白基因位于第11号染色体类β球蛋白基因的基因簇上。和β球蛋白基因一样,突变或者是微缺失能在δ球蛋白基因上发生δ球蛋白合成减少,有些还可伴有HbA2变异体的出现。虽然单纯的δ球蛋白基因(HBD MIM＃142000)缺陷不能直接产生临床相关症状,但它能干扰β地中海贫血的诊断,从而导致严重的后果。在研究中,从至广州市妇女儿童医疗中心进行地中海贫血筛查试验的40863例患者的血液样本中挑选出167例进行本实验研究。实验样本需满足以下条件: (1)血液样本毛细管电泳结果HbA2<2％,伴或不伴有HbA2变异体的存在; (2)样本血液学各项参数(如MCV、MCH等)正常; (3)排除缺铁性贫血等其他疾病。 研究结果:在挑选出的167例实验样本中有152例样本发现有δ球蛋白基因的缺陷,阳性检出率为91%。在本次研究中共发现了21种δ球蛋白基因缺陷类型,其中有12种是之前未报道过的新发现的缺陷类型。其中-77(T>C)是中国人群δ球蛋白基因缺陷最普遍的类型,其次是-30(T>C),它们一起占所有缺陷的82.3%。当患者为β地中海贫血和δ球蛋白基因缺陷的复合体时,他/她的MCV、MCH水平可能降低但有正常的HbA2值,因此容易被误诊为缺铁性贫血等其他疾病而导致β地中海贫血的漏诊。因而,对于那些MCV、MCH降低但HbA2水平正常或临界的患者不能仅仅考虑缺铁性贫血或者是α—地中海贫血,特别是对于夫妻一方已经确诊为β地贫,另一方表现出以上性状的夫妇,对他/她做进一步的α和β地中海贫血基因分析是非常有必要的,以预防重型β地贫患儿的出生。 一、目的： 1.调查中国人群中δ球蛋白基因缺陷率及各缺陷类型频率。 2.δ球蛋白基因缺陷类型与HbA2水平之间的关系。 3.δ球蛋白基因缺陷类型与HbA2变异体之间的关系。 二、方法： 1.收集2010年5月至2012年5月至广州市妇女儿童医疗中心进行地中海贫血毛细管电泳筛查实验的40863例患者血液标本。 2.根据实验设定标准: (1)血液样本毛细管电泳结果HbA2<2%,伴或不伴有HbA2变异体的存在; (2)样本血液学各项参数(如MCV、MCH等)正常; (3)排除缺铁性贫血等其他疾病。一共挑选出167例符合实验条件的样本。 3.在Pubmed数据库中查找δ球蛋白基因序列,并根据http://globin.cse.psu.edu/hbvar/menu.html中所公布的δ球蛋白基因缺陷类型,在δ球蛋白基因序列中标记。参考近10年文献,并用PRIMER5.0进行引物设计。 4.摸索PCR反应条件并进行PCR,扩增出所需片段。 5.对PCR扩增片段进行2%琼脂糖电泳鉴定是否扩增出目的片段。 6.大批量PCR扩增出目的片段,并送华大基因公司进行测序。 7.对测序结果进行分析和统计归类。 三、结果： 1.167例样本中共有152例有δ球蛋白基因的缺陷,阳性检出率为91%。 2.在152例有δ球蛋白基因的缺陷的样本中有5例在Sebia毛细血管电泳中发现了HbA2变异体,剩余的147例则仅有HbA2水平降低的表现。 3.共发现了21种δ球蛋白基因缺陷类型,其中9种为之前已知的突变: 1)-77(T>C); 2)-30(T>C); 3)HbA2-Troodos[δ116(G18)Arg→Cys,CGC>TGC]; 4)δ initiation codon[ATG>ATA]; 5)HbA2 Liangcheng[δ117(G19)Asn→Asp,AAC>GAC]; 6)HbA2 Coburg[δ116(G18)Arg→His,CGT>CAT]; 7)HbA2-Wrens[δ98(FG5)Val→Met,GTG>ATG]; 8)HbA2-Yialousa[δ27(B9)Ala→Ser,GCC>TCC]; 9)codon 4(ACT>ATT)]以及12种之前没有报道过的新发现的球蛋白基因缺陷类型: 1)Codon 10(-G)(HBDc.31delG); 2)HbA2-Guangzhou[δ10(A7)Ala→Pro,GCT→GGT(HBDc.31G→C)]; 3)HbA2-Qingyuan[δ17(A14)Lys→Thr,AAA→ACA(HBDc.53A>C)]; 4)HbA2-Dongguan[δ21(B3)Asp→Gly,GAT→GGT(HBDc.65A>G)]; 5)HbA2-Hunan[δ28(B10)Leu→Pro,CTG→CCG(HBDc.86T>C)]; 6)HbA2-Huadu[δ42(CD1)Phe→Leu,TTT→CTT(HBDc.127T>C)]; 7)HbA2-Conghua[δ44(CD3)Ser→Cys,TCC→TGC(HBDc.134C>G)]; 8)Codons59-60(+GG)(HBDc.180_181dupGG); 9)Codon87(-A)(HBDc.263delA); 10)HbA2-Meizhou[δ108(G10)Asn→Asp,AAT→GAT(HBDc.325A>G)]; 11)Codon113(+TG)(HBDc.341_342dupTG); 12)IVS-Ⅰ3′(AG>-G)(HBDc.93-2delA)。 4.统计出δ球蛋白基因各缺陷类型频率。 5.统计出δ球蛋白基因缺陷类型和对应的HbA2水平。 四、结论： 1.中国人群中δ球蛋白基因最常见的缺陷类型为-77(T>C),其次为-30(T>C),一起占全部缺陷的82.3%。 2.中国人群中δ球蛋白基因突变率为0.4%。意味着δ球蛋白基因缺陷在中国人群中可能是很罕见的。因此,对于那些有正常的HbA2水平但MCV、MCH降低的患者目前还不需要进行常规的δ球蛋白基因分子水平检测。 3.对于那些MCV、MCH降低但HbA2水平正常的患者,诊断时不能仅仅考虑缺铁性贫血或者是α地中海贫血,特别是对于夫妻一方已经确诊为β地贫,另一方表现出以上性状的夫妇,对他/她做进一步的α和β地中海贫血基因分析是非常有必要的,以预防重型β地贫患儿的出生。