【摘 要】
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人白细胞介素18能诱导T细胞产生IFN-γ,还能增强脾T细胞增殖能力及脾NK细胞活性,是一个潜在的抗肿瘤抗微生物感染药物.根据大肠杆菌的偏爱密码子和翻译起始区(translation in
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人白细胞介素18能诱导T细胞产生IFN-γ,还能增强脾T细胞增殖能力及脾NK细胞活性,是一个潜在的抗肿瘤抗微生物感染药物.根据大肠杆菌的偏爱密码子和翻译起始区(translation initiation region,TIR)的二级结构,设计并人工合成了人白细胞介素18的基因,表达的蛋白序列不发生变化.新合成基因mRNA的翻译起始区自由能高于原基因的翻译起始区自由能,结构较松散,从而利于翻译.将新合成基因克隆到载体pMFT7-5的NdeI和SalI位点,经转化JMl09(DE3)和BL21(DE3),得到工程菌JTI和BTI.发酵结果表明,JTI表达效果比BTI好,摇瓶表达目的约蛋白占全菌总蛋白的30%,经westernblot验证,表明目的蛋白有免疫学活性.在50L生物反应器上对JTI进行中试研究,最终获得细胞密度到达OD600=68,干重达到16.7g/L,表达率为25%左右,目的蛋白的产率为2.24g/L.并进行了rhIL-18蛋白的分离纯化研究,得到电泳纯的rhIL-18蛋白.
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