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目的:本课题将影响脂代谢的载脂蛋白M(apolipoproteinM，apoM)基因作为脑梗死的候选基因，旨在探讨apoM基因单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)与脑梗死的相关性，以及与血脂代谢的关系。探索脑血管病分子致病机制，为揭示脑血管病病因及防治提供基础依据。
方法:应用聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)DNA直接测序法结合聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(polymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism，PCR-RFLP)方法对330例中国北方汉族健康对照组和320例急性脑梗死患者apoM基因SNP进行分析。首先PCR扩增基因组DNA直接测序法筛查apoM基因多态性，用包含所有6个外显子和5个内含子长2647bp的DNA片段的5种PCR产物直接测序，发现1号内含子rs805264位点G→A置换、5号内含子rs707922位点G→T置换及5号内含子rs707921位点C→A置换三个多态位点。此三个多态性均无酶切位点，用错配引物引入酶切位点，rs805264位点先扩增640bp的片段进行巢式PCR，以限制性内切酶HaeⅢ进行酶切；5号内含子rs707922位点和rs707921位点先扩增一相同的646bp片段后进行巢式PCR，分别以限制性内切酶HaeⅢ和EstⅡ进行酶切，3％琼脂糖凝胶电泳分离基因多态性。分别比较中国北方汉族健康人群与不同国家及地区不同人种间、急性脑梗死组与健康对照组间的基因型及等位基因频率的差异。并比较散发性脑梗死组(NFCI)及有家族史的脑梗死组(FCI)；有高血压的脑梗死组及无高血压的脑梗死组、有糖尿病的脑梗死组及无糖尿病脑梗死组、无卒中危险因素组(NRF)与有危险因素(RF)的脑梗死组间apoM基因SNP分布的差异；比较不同基因型组间总胆固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三脂(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoprotein-cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoprotein-cholesterol，LDL-C)、C反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)、空腹血糖(bloodsugar)BS水平及体重指数(bodymassindex，BMI)有无差异。
结果:1.中国北方汉族正常人群中rs805264位点GG型占优势为78.5％、GA型20.3％、AA型1.2％，G等位基因频率为0.886，A等位基因频率为0.114。rs707922位点GG型77.3％、GT型20.6％、TT型1.2％；G等位基因频率为0.885，T等位基因频率为0.115。rs707921位点CC型79.1％、CA型19.7％、AA型1.2％，G等位基因频率为0.889，A等位基因频率为0.111。三个位点的SNP与亚洲人比较无显著性差异，与非洲及欧洲人种基因型及等位基因频率差异显著。
2.320例中国北方汉族脑梗死组rs805264位点SNP基因型以GG型占优势为67.5％、GA型30.3％。AA型2.2％，G等位基因频率为0.827，A等位基因频率为0.173。GA型及GA型+AA型频率及A等位基因频率均明显高于对照组。
3.脑梗死组rs707922位点GG型占66.9％、GT型30.9％、TT型2.2％，等位基因频率G为0.823，T为0.177；GT型和GT型+TT基因型以及等位基因A频率显著高于对照组。
4.脑梗死组rs707921位点基因型CC型为67.8％、CA型30％、AA型2.2％，等位基因频率C为0.828，A为0.172；CA型及CA型+AA型以及T等位基因频率分别高于对照组。
5.apoM基因rs805264位点、rs707922位点及rs707921位点SNP在中国汉族人群中呈现明显的连锁不平衡，rs805264位点、rs707922位点及rs707921位点的等位基因G-G-C紧密连锁，rs805264位点、rs707922位点及rs707921位点等位基因A-T-A紧密连锁，A-T-A单体型显著高于对照组。FCI组A-T-A单体型频率高于NFCI组。NRF与RF脑梗死组间单体型差异不显著，但NRF脑梗死A-T-A型显著高于对照组。
6.患者组及对照组内rs805264位点、rs707922位点及rs707921位点A-T-A单体型血清TC、TG水平均显著高于G-G-C单体型组，HDL-C低于G-G-C单体型组。LDL-C、BS无差异。
7.发现一脑梗死男性患者1号内含子近1号外显子3端T-37C位点突变，4号内含子近4号外显子3端C59-A位点突变。在SNP数据库上检索未发现这两个多态位点，为新的突变。
结论:1.中国北方汉族人apoM基因存在1号内含子rs805264位点、5号内含子rs707922位点及rs707921位点三个SNP位点。不同种族及地区apoM基因SNP分布存在差异。
2.rs805264位点GA基因型及A等位基因、rs707922位点GT基因型及T等位基因、rs707921位点CA基因型及A等位基因与脑梗死相关。
3.apoM基因rs805264位点、rs707922位点及rs707921位点SNP在中国北方汉族人群中呈现显著的连锁不平衡，rs805264位点G、rs707922位点G及rs707921位点C紧密连锁，rs805264位点A、rs707922位点T及rs707921位点A紧密连锁。三个位点多态对脑梗死的致病危险可能起到协同作用，等位基因A-T-A单体型可能是脑梗死的潜在遗传致病危险因子。
4.rs805264位点、rs707922位点及rs707921位点等位基因A-T-A单体型可能影响脂质代谢。
第二部分目的:本研究分析apoH(apolipoproteinH，apoH)基因单核苷酸多态性(SNP)与脑梗死及与血脂代谢的关系。旨在探讨apoH基因SNP与脑梗死的相关性，探索脑血管病分子致病机制，为揭示脑血管病病因及防治提供基础依据。方法:采用PCR-RFLP分析方法，检测北方汉族320例急性脑梗死患者及330例健康对照组apoH基因第7外显子G817T位点SNP。并分析apoH基因G817T位点不同基因型对总胆固醇(totalcholesterol，TC)、高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoprotein-cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoprotein-cholesterol，LDL-C)、C反应蛋白(C-reactiveprotein，CRP)、空腹血糖(bloodsugar)BS水平及体重指数(bodymassindex，BMI)的影响。结果:apoH基因G817T位点有TT、GT和GG三种基因型，以GT型为主。与非洲、日本、美国(欧洲后裔)人种比较基因型总体分布有明显差异；与中国长沙汉族人基因型分布也不同。等位基因型与非洲人差异不明显；与日本人及美国人等位基因频率差异显著。脑梗死组TT基因型及T等位基因频率显著高于对照组，差异有统计学意义。不同基因型组间TC、HDL-C、LDL-C、CRP、BS水平及BMI均无差异。TT型、GT型TG水平均高于GG型，TT型与GT型组间比较血TG水平无明显差异。结论:apoH7号外显子G817T位点多态性与脑梗死密切相关，T等位基因型可能与脑梗死遗传危险有关，并可能影响甘油三酯的代谢。