【摘 要】
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人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)类药物作为临床有效治疗血液栓塞疾病的特效药物有着巨大的市场前景.由Boehr inger Mannheim公司开发的瑞替普酶(r-PA),由于体内半衰期较长、使
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人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)类药物作为临床有效治疗血液栓塞疾病的特效药物有着巨大的市场前景.由Boehr inger Mannheim公司开发的瑞替普酶(r-PA),由于体内半衰期较长、使用方便等优点成为该类药物中的佼佼者.但作为细菌发酵的表达产物,蛋白包涵体的复性处理等所带来的高昂费用成为该产品制备工艺的薄弱环节,造成了其产品价格的居高不下(1485$/10IU,2004年美国市场价).选择新的更有效的表达系统成为提高得率、降低成本的关键.利用动物乳腺生物反应器生产基因工程药物是一种全新的生产模式,与其它表达体系相比,具有蛋白修饰完全、产量高、维持成本低、纯化工艺相对简单等优点.基于此,探索瑞替普酶的动物乳腺生物反应器的制备工艺,具有巨大的社会效益和经济价值.最近,体细胞基因打靶技术和体细胞克隆技术的日臻成熟,为制备精确染色体修饰的转基因动物乳腺生物反应器提供了一种全新的方法.该文以制备瑞替普酶动物乳腺生物反应器为目的,开展了相关载体构建、表达载体功能验证、山羊胎儿成纤维细胞的基因打靶和体细胞克隆方法生产转基因动物等四个部分的研究工作.
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