两种泥鳅SOX3基因的克隆、表达和功能分析

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Sox基因家族是一类与Sry(sexdetermination region of Y chromosome)基因同源的,其编码含有可结合DNA的高迁移率基团(High-mobility group,HMG—box)HMG盒区的超基因家族。Sox3属于SoxB1亚家族,是Sox家族中唯一定位于X染色体上的基因,也是与SRY/Sry同源性最高的一个基因。本研究利用RACE技术克隆得到了泥鳅和大鳞副泥鳅Sox3基因cDNA全长序列:其中泥鳅Sox3基因cDNA全长为1863 bp,包括295 bp 5’非翻译区,674 bp3’非翻译区(含polyA尾)和编码297个氨基酸的开放阅读框,分子量为33109.5KD,理论等电点为9.63;大鳞副泥鳅Sox3基因cDNA全长为1865 bp,包括295bp 5’非翻译区,676 bp 3’非翻译区(含polyA尾)和编码297个氨基酸的开放阅读框,分子量为33095.5 KD,理论等电点为9.63。分离得到的两条Sox3序列均含有Sox家族保守的HMG-box序列和SoxB亚家族的Soxp motif结构。利用半定量和荧光实时定量RT-PCR对两种泥鳅不同胚胎发育时期以及不同成体组织进行Sox3基因时空特异性表达模式分析。在泥鳅胚胎中,Sox3在神经胚期表达量达到最高,随后Sox3表达降低;在大鳞副泥鳅胚胎中,Sox3在发育的早期即原肠胚期表达量最高,随后表达量降低。两种泥鳅Sox3在6种不同成体组织中广泛分布,表达模式相似,在卵巢和精巢表达均较高;在脑、心脏、肝脏中Sox3也有强烈表达;但肾脏中表达量最低。原位杂交试验结果显示:Sox3基因在泥鳅和大鳞副泥鳅精巢的初级精母细胞中可以检测到微弱表达,而卵巢的初级卵母细胞细胞质中有强烈表达,因此推测Sox3在性腺(尤其是卵巢)发育过程中发挥关键性作用。脑切片中也可以检测到较强的阳性信号,推测其在神经系统发育中发挥功能。胚胎整体原位杂交结果发现,Sox3在两种泥鳅胚胎发育早期阶段、体节形成期的体节以及脊柱中均发现较强阳性信号,孵出期以后Sox3主要集中在胚胎头部、脊柱以及内脏中表达。我们的研究证明Sox3基因主要参与早期胚胎的发育、神经系统的形成以及性腺(尤其是卵巢)的发育。Sox3基因被证明在下丘脑-垂体(Hypothalamic-pituitary,HP)轴形成中起着重要作用,而鱼类性腺的发育也恰恰受到神经内分泌系统中的下丘脑-垂体-性腺(Hypothalamic-pituitary-gonad,HPG)轴的主导调控作用。由此可见,Sox3基因在整个个体发育过程中是起着相当重要的作用,尤其是在与HPG轴相关的发育过程中具有复杂的调控机制,扮演着重要的角色。
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