低剂量铬暴露促进前列腺癌细胞增殖进展的机制探索

• 作 者: 王宝龙
• 机 构: 天津医科大学
• 出 处: 天津医科大学
• 发表日期: 2018年01期
• 关键词: 前列腺癌

目的：探索低浓度铬暴露促进前列腺癌细胞生长的可能机制，探讨CEBPB通过IL6/STAT3信号通路在铬促进的前列腺癌细胞生长中的作用和机制，探讨TGF-β-EMT信号通路在促进低浓度铬暴露前列腺癌进展中的作用和机制。
　　方法：1）使PC3处于低浓度铬暴露环境中。通过MTT等方法检测PC3细胞在低浓度铬暴露下的生长情况。收集细胞总RNA和总蛋白，实时荧光定量PCR检测CEBPBmRNA表达水平，WB法检测CEBPB蛋白表达水平。合成了靶向CEBPB的siRNA，并通过Lipofectamine3000转染到前列腺癌PC3细胞系中。通过实时荧光定量PCR检测CEBPBmRNA的表达。MTT法检测转染前后PC3细胞的生长能力。2）收集细胞总RNA，分泌蛋白和总蛋白，并通过实时荧光定量PCR检测IL6的mRNA表达水平。通过ELISA和WB实验检测IL6的蛋白表达水平，通过WB实验检测磷酸化STAT3和总STAT3的表达水平。探讨IL6/STAT3信号通路在该过程中的作用，并通过小分子抑制剂抑制STAT3的活化，MTT法检测抑制IL6/STAT3信号通路后PC3细胞生长能力的变化;3）通过WB检测低浓度暴露后的PC3细胞中TGF-β的水平，推测其促进前列腺癌细胞体外侵袭过程中有一定作用，并通过检测EMT途径中相关因子的表达来检测TGF-β是否激活EMT途径。用TGFβsiRNA特异性降低其水平后，测定各EMT途径相关因子表达，明确是否能够翻转其异常表达。
　　结果:1）发现暴露于低浓度的铬显著促进了前列腺癌细胞系PC3的生长。结果表明，低浓度的铬暴露显著上调了前列腺癌细胞系PC3中CEBPBRNA和蛋白的表达。在siRNA敲低CEBPB表达后，低浓度铬暴露促进前列腺癌细胞PC3的生长受到显著抑制;2）实验结果表明，低浓度的铬暴露可以显著上调前列腺癌细胞系PC3中IL6mRNA的表达。并能显著上调前列腺癌细胞系PC3中IL6和总蛋白的表达，显著上调中磷酸化STAT3的水平。在抑制STAT3的活性后，由低浓度的铬暴露促进的前列腺癌细胞PC3的生长被显著抑制。用siRNA敲低CEBPB的表达后，IL6的mRNA和蛋白表达下调，磷酸化STAT3的水平下降，IL6/STAT3信号通路被抑制；3）实验结果表明，低浓度暴露后的PC3细胞中TGF-β的水平明显升高，EMT途径相关因子的表达显著升高。用TGFβsiRNA特异性降低其水平后，各EMT途径相关因子异常表达被逆转。
　　结论:1）低浓度铬暴露可显著促进前列腺癌细胞系PC3的生长;2）通过上调前列腺癌细胞系PC3中CEBPB的表达水平，低浓度的铬暴露，激活IL6/STAT3信号通路，促进前列腺癌细胞侵袭的进展;3）低浓度的铬暴露可能通过TGF-β-EMT信号通路在促进前列腺癌进展。