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大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticumMaxim.ex Balf.或药用大黄.Rheum offcinale Baill.的干燥根和根茎。具有泻下攻积,清热泻火,逐瘀通经,利湿退黄的功用。中医传统理论认为,生大黄苦寒、泻下作用峻烈,易伤脾胃,多用于大便秘结、水肿、黄疸等。熟大黄苦寒泻下作用缓和,腹痛之副作用减轻,用于年老体虚、儿童患者。
生、熟大黄功效相异,苦寒泻下药性变化明显,根源还是其内在物质基础发生变化所致,中药大黄是“生熟异治”饮片的典型代表。因此,在国家自然基金重点项目“炮制改变大黄药性科学内涵变化规律研究”中,本论文以大黄临床常用的生大黄、熟大黄为研究对象,在对生大黄进行系统的化学成分研究的基础上,通过生、熟饮片指纹图谱的比较研究和主要色谱峰的指认,并结合蒽醌苷、蒽醌苷元类成分和鞣质单体在大黄炮制前后的定量分析,初步阐明生、熟大黄化学成分的组成及其变化规律,为阐释大黄炮制原理的科学内涵奠定基础,并为生、熟大黄饮片的质量评价提供科学依据。
本论文分三部分:
第一部分实验部分
第一章生大黄化学成分研究
取大黄粗粉共10kg,以15倍量70％乙醇渗漉提取,提取物经大孔吸附树脂、硅胶柱色谱等方法进行分离、纯化,通过化学和光谱等方法(IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、HMQC和HMBC)鉴定化合物结构。从大黄中共分离、鉴定了13个化合物,其中包括:2个蒽醌苷、5个蒽醌苷元、2个苯丁酮及其苷、2个二苯乙烯及其苷、2个鞣质。分别为:没食子酸(化合物1)、(+)－儿茶素(化合物2)、大黄酚(化合物3),大黄素甲醚(化合物4),大黄素(化合物5),大黄酸(化合物6),芦荟大黄素(化合物7),大黄酸－8-O－β－D－葡萄糖苷(化合物8)、芦荟大黄素－8－O－β－D－葡萄糖苷(化合物9),反－3,3’,5’－三羟基-4-甲氧基二苯乙烯(化合物10),反－3,5,4’－三羟基苯乙烯基-4-O－β－D－(6"-O－没食子酰基)－葡萄糖苷(化合物11),4－羟基苯丁酮(化合物12),4’-羟基苯基－2-丁酮-4-O-β—D－(6”－没食子酰基)－葡萄糖苷(化合物13)。为生、熟大黄饮片HPLC指纹图谱色谱峰指认及主成分含量比较研究提供对照品。
第二章生、熟大黄饮片HPLC指纹图谱研究及色谱峰指认
采用RP-HPLC法,研究建立了2个检测波长下生、熟大黄饮片的HPLC指纹图谱鉴别方法,通过对生、熟大黄饮片各10批样品的测定,分别建立了生、熟大黄的对照指纹图谱。生片分别标定共有峰38、18个(280、430 nm),熟片分别标定共有峰35、11个(280、430nm)。并对对照指纹图谱进行了色谱峰的指认,其中,生片指认峰各12、7个(280、430 nm),熟片指认峰各11、7个(280、430 nm)。分析测定结果表明,生、熟大黄饮片HPLC指纹图谱有明显差异,主要表现为色谱峰数量以及峰面积的改变,提示大黄经炮制后其化学成分在种类上和含量上均发生了明显改变。这为生、熟大黄饮片定性区分及质量控制提供了实验依据。
第三章生、熟大黄炮制前后主要化学成分的含量比较研究
首次建立了以RP-HPLC法测定生、熟大黄饮片中3类(游离蒽醌类、蒽醌苷类、鞣质单体类)共9个成分的含量测定方法,从生、熟大黄饮片(各10批)的测定结果可以看出:5个主要游离蒽醌类成分(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)的含量,熟片明显高于生片；而蒽醌苷类成分(芦荟大黄素－8－O－β－D葡萄糖苷、大黄酸-8－O－β－D葡萄糖苷)的含量,熟片含量显著降低,仅为生片的二分之一。说明蒽醌苷类成分可能在炮制过程中一定程度上受热破坏或转化为游离蒽醌类成分。炮制前后,鞣质单体类成分(没食子酸、儿茶素)的含量变化显著。其中,没食子酸在熟片中的含量明显高于生片近3倍；儿茶素在熟片中检测不到,此与鞣质类成分在炮制过程中受热分解或破坏密切相关。综合分析以上成分的含量进行测定,推测大黄炮制后苷类成分受热分解,有向苷元类成分转化的趋势。主要成分含量测定研究为阐明大黄炮制过程中的化学成分变化及制定生、熟大黄饮片的质量评价指标奠定了基础。
第二部分结果与讨论
通过化学成分、指纹图谱及主要成分的含量研究,初步揭示了大黄炮制前后其化学成分的变化规律,为阐明大黄炮制原理的科学内涵及饮片质量的评价标准提供了科学依据。
第三部分文献研究
查阅了近30年来有关生、熟大黄饮片的国内外文献研究资料,对生大黄的化学成分、药理作用及熟大黄炮制等研究现状进行了系统的整理和分析,为本课题的顺利实施提供了有益的借鉴。