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三氯乙烯(Trichloroethylene，TCE)是工业上广泛应用的一种有机溶剂，主要用作金属表面脱脂剂、黏合剂、润滑剂、冷冻剂等。TCE主要通过呼吸道吸入和皮肤吸收进入人体产生职业性危害，吸收后主要蓄积于肝脏、脑、心脏等器官。体内外和动物实验证明TCE及其代谢产物可引起癌变、畸变及免疫毒性作用等。国际癌症研究署(IARC)在1995年对TCE致癌性分类做了修改，将其对人类非致癌改为“对人类可能致癌”。课题组在前期的研究中，在国内外首次利用蛋白质组学技术开展三氯乙烯职业中毒相关特异蛋白的研究，以期从蛋白质整体水平上认识TCE中毒发病机理。本论文在前期初步筛选出差异蛋白SET的基础上，培养L-02肝细胞，以0，5，10，15，20，25，30，35，40 mmol/L TCE刺激24 h，采用CCK8法观察细胞增殖功能，建立TCE作用L-02肝细胞剂量.反应关系，通过概率单位分析确定了TCE致L-02肝细胞的半数抑制浓度为15.95mmol/L。以半数抑制浓度作为最高染毒浓度，采用倍减的方法进行TCE染毒L-02肝细胞，westem blotting验证SET蛋白的表达量变化，结果与前期双向电泳结果一致，确定SET蛋白为TCE致L-02肝细胞毒性的差异蛋白。
利用重叠PCR法成功将SET基因和TAP基因融合成SET-TAP片段，成功构建pcDNA3.1/ SET-TAP重组表达载体，转染肝细胞后，用荧光定量PCR和Westem blotting检测结果显示，SET-TAP融合蛋白成功表达。利用串联亲和纯化(tandem affinitypurification，TAP)技术从转染pcDNA3.1/SET-TAP重组表达载体的L-02肝细胞总蛋白成功纯化SET蛋白复合体。用LC-ESI-MS/MS技术鉴定蛋白质复合体，共鉴定出62个蛋白，通过PICASSO分析得到42个与SET蛋白具有GO共注释的蛋白，其中包括4个已知相互作用蛋白，说明质谱鉴定结果具有一定的可信度，其中15个蛋白的得分在4分以上，在TCE染毒处理的L-02细胞中，延长因子1al(eEFIA1)，延长因子la2( eEFIA2)，DNA损伤结合蛋白1(DDB1)和组蛋白-赖氨酸N端-甲基转移酶(MLIA)蛋白与SET蛋白存在特异相互作用，这些蛋白主要涉及染色质重塑、蛋白翻译、肿瘤生成和组蛋白乙酰化等功能。研究结果从一定程度上阐明了SET蛋白在TCE致L-02肝细胞毒性中所扮演的重要角色，为从蛋白质水平上阐明TCE致机体损伤的机理奠定了基础。