免疫球蛋白G在肺癌中的表达及其调控癌细胞转移的研究

• 作 者: 蒋春樊
• 机 构: 汕头大学
• 出 处: 汕头大学
• 发表日期: 2013年期
• 关键词: 免疫球蛋白G 肺癌 免疫组化 淋巴结转移 信号通路

背景和目的：　　经典的免疫学理论认为：免疫球蛋白G（Immunoglobulin G, IgG）是由来自于人脾脏和淋巴结等外周免疫器官的成熟的B淋巴细胞所产生的主要的免疫球蛋白。近几年的研究表明，一些非造血来源的细胞如恶性肿瘤细胞、眼睛、神经元也可以产生免疫球蛋白 G。本研究利用RT-PCR、显微切割结合的RT-PCR和原位杂交技术从mRNA水平证实了免疫球蛋白G在肺癌组织及细胞系中的存在，利用免疫组化、免疫荧光和免疫蛋白印迹技术在蛋白水平水上证实而且定位了免疫球蛋白G在肺癌组织及细胞系中表达的部位与分布，统计分析显示肺癌组织表达的IgG与肿瘤的临床分期、病理学分级及淋巴结转移相关。同时，利用siRNA干扰技术特异下调癌细胞系中IgG的表达，观察到癌细胞黏附和迁移能力的下降，并发现随着IgG表达的下降，转移相关基因MTA1在mRNA和蛋白水平上也明显下降，免疫组化证实MTA1与IgG的表达呈共定位关系。在肺癌细胞中IgG可以通过MTA1导致转移的发生，然而这一信号通路的细节还有待于进一步阐明。　　材料与方法：　　1、研究对象86例肺癌标本（包括46例肺鳞癌，40例肺腺癌）分别取自汕头大学医学院附属肿瘤医院病理科及湖北省襄阳市中心医院病理科存档的2006-2011年福尔马林固定石蜡包埋标本。4例新鲜手术切除肺癌标本（2例肺鳞癌、2例肺腺癌）取自汕头大学医学院附属肿瘤医院心胸外科。肺癌细胞系：A549、SK-MES-1。　　2、免疫组化检测肺癌石蜡切片中IgGγ重链、κ轻链、λ轻链蛋白的表达及定位。IgG与MTA1表达间的关系。　　3、RT-PCR检测肺癌细胞系中IGHG1、κ恒定区、λ恒定区、γ可变区、κ可变区、λ可变区、RAG-1、RAG-2和AID基因的表达。　　4、显微切割结合的RT-PCR检测新鲜肺癌组织中IGHG1、κ恒定区、λ恒定区、γ可变区、κ可变区、λ可变区、RAG-1、RAG-2和AID基因的表达。　　5、原位杂交检测肺癌石蜡切片及肺癌细胞系中IGHG1 mRNA的表达。　　6、蛋白印迹检测肺癌细胞系中IgGγ重链、κ轻链、λ轻链、RAG-1、RAG-2和AID蛋白的表达。siRNA干扰后，IgG及MTA1蛋白表达的变化。　　7、间接免疫荧光检测肺癌细胞系中IgGγ重链、κ轻链、λ轻链蛋白的表达及定位。　　8、定量PCR检测肺癌细胞系在siRNA干扰后，IgG及MTA1 mRNA表达的变化。　　9、siRNA干扰技术特异性抑制肺癌细胞系中IgG的表达。　　10、黏附实验观察肺癌细胞系在下调IgG表达后的黏附能力的改变。　　11、侵袭实验观察肺癌细胞系在下调IgG表达后的迁移能力的改变。　　12、数理统计分析肺癌组织中表达IgG与临床病理参数间的关系；分析IgG与MTA1表达间的关系；分析siRNA干扰后不同实验组中观察因子的差异。　　结果：　　本研究在mRNA与蛋白水平，利用多种方法证实肺癌细胞能够产生IgG。IgG阳性的癌细胞分布具有独特的规律。IgG表达的下降造成癌细胞黏附及迁移能力的减弱。随着 IgG表达的下降，MTA1的表达也明显下调。肺癌石蜡切片上，MTA1与IgG的表达呈共定位的关系，IgG的表达与肺癌的临床分期、病理学分级及淋巴结转移相关， MTA1的表达与肺癌的淋巴结转移高度相关。　　结论：　　1、肺癌细胞能够表达免疫球蛋白G。　　2、肺癌细胞产生的免疫球蛋白G具有促进癌细胞转移的能力。　　3、肺癌细胞可能通过IgG-MTA1信号通路促进癌细胞转移。