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本论文对鸡精液低温保存和冷冻保存稀释液、冷冻保护剂及冷冻保存程序进行了研究,希望筛选出能够在生产上推广应用的优良低温保存及冷冻保存稀释配方,并优化鸡精液冷冻保存程序,提高解冻后精子活力和受精率,为更好地发挥种鸡的繁殖性能、取得更高的经济效益提供基础。
第一章鸡精液稀释与低温保存研究中,比较了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种稀释液,并从中筛选出最优稀释配方Ⅱ,接着进一步研究了Ⅱ稀释精液保存后输精效果,并对鸡稀释精液低温保存后精子的形态结构进行了观察研究。结果表明:
1)含葡萄糖—磷酸缓冲液的Ⅱ稀释精液保存96h和192h活力分别显著高于和极显著高于含tris缓冲液的Ⅰ、Ⅲ稀释精液;Ⅱ稀释精液的有效保存时间(164±4h)显著高于Ⅰ、Ⅲ稀释精液(120±2h和137±5h)。Ⅱ稀释配方对不同品种公鸡精液进行稀释后低温保存192h均有0.6以上的活力;
2)Ⅱ稀释精液输精的种蛋受精率高于原精输精但差异不显著,出苗率和青苗率均显著高于原精输精。Ⅱ稀释精液低温保存6h输精与原精输精受精率之间差异均不显著;保存一天和三天后输精的受精率极显著低于原精输精;
3)鸡精液经过低温保存后弯尾率与精子活力的变化之间具有一定的相关性,相关系数R2为0.5118。低温保存后精子的头、颈部超微结构多出现受损,主要表现为:顶体膜、质膜和核膜膨胀或破裂,顶体膨胀变形;线粒体鞘结构破损等。
第二章鸡精液冷冻保存研究中,研究了不同冷冻稀释配方、冷冻保护剂、冷冻—解冻方法及冷冻保存后精子形态结构的变化,结果表明:
1)采用甘油作冷冻保护剂的精子冻后活力及复苏率均显著高于DMSO;甘油作冷冻保护剂时,A配方(5%葡萄糖液)冻后活力及复苏率均显著高于配方B(11%蔗糖液)、极显著高于配方C(1.59%葡萄糖):A配方中添加13%的甘油冻后活力和复苏率均显著高于10%和15%的甘油且极显著高于4%和7%的甘油;
2)颗粒冷冻中,采用液氮熏蒸法的冻后活力和复苏率均显著高于直接投入液氮法;采用细管冷冻的冻后活力和复苏率均显著高于颗粒冷冻;采用两步稀释法的冻后活力和复苏率均显著高于一步稀释;精液平衡0.5h、1h、2h精子冻后活力和复苏率均差异不显著;熏蒸时间为10分钟的冻后活力和复苏率均显著高于5分钟,且略高于15分钟但差异不显著;37—40℃解冻后精子活力和复苏率显著高于20-25℃,但与55—60℃差异不显著;
3)甘油浓度分别为4%、7%和13%的三个冷冻保存试验组,冻后活力都有0.5以上,但输精后受精率几乎为零,表明冷冻后精子已基本丧失受精能力。
4)鸡精液冷冻保存后精子的弯尾率与冻精活力之间具有很高的相关性(R2=0.9849)。冷冻保存后精子的形态结构多出现明显异常和受损,精子的顶体、核、质膜、线粒体鞘等结构出现不同损伤。而且随着冷冻保护剂的浓度越高,形态结构异常越明显。
研究表明:低温保存Ⅱ配方(葡萄糖—磷酸缓冲液)效果最好;冷冻保存A0配方(5%葡萄糖—20%卵黄—13%甘油)效果最好;甘油的保护效果明显优于DMSO,最佳甘油添加浓度为13%;冷冻程序采用细管冷冻法、两步稀释法、平衡0.5h、熏蒸10min、37—40℃解冻效果最佳;低温保存和冷冻保存会对精子的形态及超微结构造成损伤,从而降低精子活力和受精力。