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宫颈癌是目前世界上女性恶性肿瘤中的第二位常见肿瘤。自从上世纪五、六十年代宫颈细胞学检查作为主要手段应用于宫颈癌筛查以来，已使宫颈癌的发生率和死亡率明显下降。目前宫颈细胞学检查报告系统采用TBS分类法，然后根据不同的结果采取相应的处理手段，但迄今细胞学诊断为非典型鳞状细胞-意义不明（atypical squamous cells of undetermined significance，ASCUS）和鳞状上皮内低度病变（low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）患者的处理与随访尚有争议。美国阴道镜宫颈病理学会（American Society for Colposcopy and Cervical Pathology，ASCCP）建议可以选择：①重复细胞学检查；②立即阴道镜检查；③高危型人乳头瘤病毒（human papillomaviruses，HPV）检测分流管理（即对阳性者立即行阴道镜检查，对于阴性患者无临床症状者可随访）。这三种方法中，立即阴道镜检查可能存在过度诊断；而细胞学随诊又可能漏诊CIN病变，并且面临失访率高的困境。为了解这三种方法的效价比，对ASCUS、LSIL两类患者进行多中心临床试验，即ALTS试验（the Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance Low GradeSquamous Intraepithelial Lesion Triage Study）。经大样本长期随访表明，对于ASCUS来说，HR-HPV分流管理效价比高，避免过多的阴道镜检查，节省医疗资源，同时还将CIN11及以上病变的漏诊机会降到最低，但是迄今大多数研究结果发现HR-HPV检测作为ASCUS分层管理的手段仍存在着特异性低、阳性预测值不理想等问题。ALTS试验同时还分析了HR-HPV对LSIL的分流管理作用，发现这组患者中HR-HPV的感染率超过了80％，ASCCP不建议用其对这组患者进行分流管理。因此急需寻找有助于区分ASCUS和LSIL中宫颈鳞状上皮良性反应性增生和CIN病变的检测手段、尤其是高度CIN病变的标记物，以减少不必要的误诊与漏诊。
P16INK4α基因是近年来发现的与细胞周期调控密切相关的抑癌基因，位于染色体9p21，其所编码的P16INK4α是一种细胞周期依赖性激酶抑制剂，含156个氨基酸，分子质量16569ku，主要通过细胞周期素D1（cyclinD1）-CDK6-视网膜母细胞瘤（Rb）-转录调节因子E2F途径对细胞周期起负反馈调节作用。对宫颈癌相关基因的大量研究发现，几乎100％的HPV阳性的宫颈癌和癌前病变中P16INK4α呈高水平的表达，而在正常组织（细胞）中无阳性表达，并且在鳞状上皮内高度病变（HSIL）及癌的表达率明显高于在鳞状上皮内低度病变（LSIL）的表达率。现有研究发现p16INK4α可用于ASCUS的细胞学涂片的分层处理，Nieh等对66例ASCUS的研究用p16INK4α单克隆抗体E6H4免疫组化检测筛选HSIL以上病变，认为p16INK4α可用于细胞涂片为ASCUS的分层处理。本研究拟在探索通过免疫组化方法测定p16INK4α在宫颈脱落细胞中的表达情况，进一步评价p16INK4α检测在ASCUS/LSIL中的分层管理中的价值。
研究目的：
采用免疫组化方法检测p16INK4α在宫颈脱落细胞ASCUS和LSIL中的表达情况，评价其在ASCUS和LSIL中的分层处理的价值，并与高危HPV DNA检测方法进行比较，以期寻找一种更有效的ASCUS-LSIL分层处理检测方法。
研究方法：
收集2008年3月至2009年3月浙江大学医学院附属妇产科医院宫颈疾病门诊就诊的、宫颈薄层液基细胞学诊断为ASCUS和LSIL的剩余标本液，共156例。所有患者行高危HPV DNA杂交捕获Ⅱ代（HC2）检测、p16INK4α检测（结果评价采用免疫强度和宫颈脱落细胞形态相结合的方法进行评分），同时行阴道镜检查及组织病理学活检。在ASCUS中有18例涂片细胞数量不足，在LSIL中有7例涂片细胞数量不足，因此本研究共制作有效涂片ASCUS86例和LSIL45例。
结果：
1.通过Spearman相关分析显示在ASCUS和LSIL中p16INK4α评分与病变级别成正相关，前者rs=0.609，p=0.000，后者rs=0.602，p-0.000，检验水准α=0.05（双侧）。采用ROC曲线确定p16INK4α评分的最佳阈值，在ASCUS和LSIL中p16INK4α最佳阈值为2分。以p16INK4α大于等于2分为阳性标准在ASCUS中预测高级别病变敏感性为87.5％，特异性68.6％，阳性预测值38.9％，阴性预测值96.0％。在LSIL中的敏感性为90.0％，特异性71.4％，阳性预测值47.4％，阴性预测值96.2％。通过列联表卡方检验比较p16INK4α≥1和p16INK4α≥2为阳性标准预测宫颈高级别病变的准确性。在ASCUS和LSIL中都显示特异性有显著性差异，前者为X2=5.770，P<0.05，后者X2=4.769，P<0.05。而敏感性，阳性预测值和阴性预测值无统计学差异。
2.在ASCUS和LSIL中，高危HPV DNA（HC2）阳性率分别为61.6％，77.8％，其在ASCUS中预测高级别病变（≥CINⅡ）的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别93.8％、45.7％、28.3％、97.0％，在LSIL中分别为90.0％、25.7％、25.7％、90.0％。对于ASCUS和LSIL患者，p16INK4α相比高危HPV DNA有更高的特异性，两者间存在统计学差异（P<0.01），而敏感性、阳性预测值，阴性预测值无统计学差异。
3.ASCUS中53例高危HPV阳性，p16INK4α阳性24例，阳性表达率45.3％。在HPV阳性的ASCUS中，p16INK4α检测预测高级别病变（≥CINⅡ）的敏感性为86.7％、特异性71.0％、阳性预测值54.2％、阴性预测值93.1％。LSIL中35例HPV阳性，其中p16INK4α阳性19例，阳性表达率54.3％。在HPV阳性的LSIL中p16INK4α检测预测高级别病（≥CINⅡ）的敏感性为100.0％，特异性61.5％，阳性预测值47.4％，阴性预测值100.0％。
结论：
p16INK4α检测预测ASCUS中高级别病变（≥CINⅡ）的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为87.5％、68.6％、38.9％、96.0％，预测LSIL中高级别病变（≥CINⅡ）的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为90.0％、71.4％、47.4％、96.2％，且其特异性显著高于HR-HPV DNA检测。因此认为p16INK4α免疫组化检测可作为细胞学涂片为ASCUS-LSIL的一种分层管理手段。
P16INK4α基因是近年来发现的与细胞周期调控密切相关的抑癌基因，位于染色体9p21，其所编码的P16INK4α是一种细胞周期依赖性激酶抑制剂，含156个氨基酸，分子质量16569ku，主要通过细胞周期素D1（cyclinD1）-CDK6-视网膜母细胞瘤（Rb）-转录调节因子E2F途径对细胞周期起负反馈调节作用。对宫颈癌相关基因的大量研究发现，几乎100％的HPV阳性的宫颈癌和癌前病变中P16INK4α呈高水平的表达，而在正常组织（细胞）中无阳性表达，并且在鳞状上皮内高度病变（HSIL）及癌的表达率明显高于在鳞状上皮内低度病变（LSIL）的表达率。现有研究发现p16INK4α可用于ASCUS的细胞学涂片的分层处理，Nieh等对66例ASCUS的研究用p16INK4α单克隆抗体E6H4免疫组化检测筛选HSIL以上病变，认为p16INK4α可用于细胞涂片为ASCUS的分层处理。本研究拟在探索通过免疫组化方法测定p16INK4α在宫颈脱落细胞中的表达情况，进一步评价p16INK4α检测在ASCUS/LSIL中的分层管理中的价值。
研究目的：
采用免疫组化方法检测p16INK4α在宫颈脱落细胞ASCUS和LSIL中的表达情况，评价其在ASCUS和LSIL中的分层处理的价值，并与高危HPV DNA检测方法进行比较，以期寻找一种更有效的ASCUS-LSIL分层处理检测方法。
研究方法：
收集2008年3月至2009年3月浙江大学医学院附属妇产科医院宫颈疾病门诊就诊的、宫颈薄层液基细胞学诊断为ASCUS和LSIL的剩余标本液，共156例。所有患者行高危HPV DNA杂交捕获Ⅱ代（HC2）检测、p16INK4α检测（结果评价采用免疫强度和宫颈脱落细胞形态相结合的方法进行评分），同时行阴道镜检查及组织病理学活检。在ASCUS中有18例涂片细胞数量不足，在LSIL中有7例涂片细胞数量不足，因此本研究共制作有效涂片ASCUS86例和LSIL45例。
结果：
1.通过Spearman相关分析显示在ASCUS和LSIL中p16INK4α评分与病变级别成正相关，前者rs=0.609，p=0.000，后者rs=0.602，p-0.000，检验水准α=0.05（双侧）。采用ROC曲线确定p16INK4α评分的最佳阈值，在ASCUS和LSIL中p16INK4α最佳阈值为2分。以p16INK4α大于等于2分为阳性标准在ASCUS中预测高级别病变敏感性为87.5％，特异性68.6％，阳性预测值38.9％，阴性预测值96.0％。在LSIL中的敏感性为90.0％，特异性71.4％，阳性预测值47.4％，阴性预测值96.2％。通过列联表卡方检验比较p16INK4α≥1和p16INK4α≥2为阳性标准预测宫颈高级别病变的准确性。在ASCUS和LSIL中都显示特异性有显著性差异，前者为X2=5.770，P<0.05，后者X2=4.769，P<0.05。而敏感性，阳性预测值和阴性预测值无统计学差异。
2.在ASCUS和LSIL中，高危HPV DNA（HC2）阳性率分别为61.6％，77.8％，其在ASCUS中预测高级别病变（≥CINⅡ）的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别93.8％、45.7％、28.3％、97.0％，在LSIL中分别为90.0％、25.7％、25.7％、90.0％。对于ASCUS和LSIL患者，p16INK4α相比高危HPV DNA有更高的特异性，两者间存在统计学差异（P<0.01），而敏感性、阳性预测值，阴性预测值无统计学差异。
3.ASCUS中53例高危HPV阳性，p16INK4α阳性24例，阳性表达率45.3％。在HPV阳性的ASCUS中，p16INK4α检测预测高级别病变（≥CINⅡ）的敏感性为86.7％、特异性71.0％、阳性预测值54.2％、阴性预测值93.1％。LSIL中35例HPV阳性，其中p16INK4α阳性19例，阳性表达率54.3％。在HPV阳性的LSIL中p16INK4α检测预测高级别病（≥CINⅡ）的敏感性为100.0％，特异性61.5％，阳性预测值47.4％，阴性预测值100.0％。
结论：
p16INK4α检测预测ASCUS中高级别病变（≥CINⅡ）的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为87.5％、68.6％、38.9％、96.0％，预测LSIL中高级别病变（≥CINⅡ）的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为90.0％、71.4％、47.4％、96.2％，且其特异性显著高于HR-HPV DNA检测。因此认为p16INK4α免疫组化检测可作为细胞学涂片为ASCUS-LSIL的一种分层管理手段。