【摘 要】
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该课题首先观察人重组γ-干扰素对体外培养的TENON囊成纤维细胞作用的基础上,构建γ-干扰素基因真核表达载体,用脂质体介导的方法,将γ-干扰素基因体外转染TENON囊成纤维细胞
【出 处】
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中山医科大学 中山大学中山医学院 中山大学
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该课题首先观察人重组γ-干扰素对体外培养的TENON囊成纤维细胞作用的基础上,构建γ-干扰素基因真核表达载体,用脂质体介导的方法,将γ-干扰素基因体外转染TENON囊成纤维细胞,从转录和蛋白水平观察其表达,探讨γ-干扰素对体外培养的TENON囊成纤维细胞生物学行为的影响.其次将基因转移后成纤维细胞可能分泌的γ-干扰素蛋白进行纯化,并对其生物学活性进行分析.在上述工作取得成果的基础上,将γ-干扰素基因体内转移至动物模型青光眼手术滤过区,以期能局部、稳定释放γ-干扰素;抑制局部纤维组织增殖.目的在于寻找一条毒副作用低微的、基因治疗防治青光眼手术区滤过泡纤维瘢痕化的生物治疗新途径,最大限度地提高青光眼手术成功率.该课题的研究主要分为以下几个部分:第一部分,γ-干扰素对体外培养的Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用;第二部分,γ-干扰素基因转染Tenon囊成纤维细胞及初步筛选;第三部分,转γ-干扰素基因Tenon囊成纤维细胞的鉴定和生物学行为分析;第四部分,γ-干扰素基因pIRES改进型黄色荧光蛋白载体的构建和体外基因转移;第五部分,γ-干扰素蛋白质的纯化;第六部分,转γ-干扰素基因防治青光眼术区滤过泡纤维化的实验研究——体内实验.研究表明γ-干扰素能够抑制体内外眼部纤维组织的增殖,γ-干扰素基因修饰的Tenon囊纤维细胞在体外能稳定表达和分泌一定水平的γ-干扰素,将γ-干扰素基因直接注射到青光眼滤守区局部组织,可以在至少3周的时间内表达γ-干扰素,并部分抑制青光眼术后滤过区纤维的增殖和胶原的形成.该研究是基因治疗防治青光眼手术滤过区疤痕化的有益尝试,为生物治疗方法早日进入青光眼临床实践奠定基础,并为其它眼病的基因治疗提供思路.
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