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目的：近年研究表明纳米金能够阻止具有肝素结合位点的VEGFl65与其受体VEGFR-2的结合，并抑制VEGFl65的信号传导。本实验利用纳米金的这种新特性，研究纳米金能否抑制血管内皮细胞增殖并抑制裸鼠肝癌血管生成。以往研究认为白介素12(IL-12)通过诱导干扰素-γ(IFN-γ)、干扰素-γ诱导蛋白-10(IP-10)和干扰素．Y诱导单核因子(MIG)的生成，进而抑制肿瘤血管生成。然而，VEGF和Ang-2(血管生成素-2)是目前已知血管内皮细胞增殖的主要促进因子，我们推测IL-12是通过抑制肝癌组织中VEGF和Ang-2基因的表达，抑制血管内皮细胞增殖，发挥其抑制肝癌的血管生成和肝癌生长的作用。这种推测需要用实验加以证实。
方法：1.用免疫印迹方法检测纳米金是否能特异性的与bFGF肝素结合位点结合；用纳米金与血管内皮细胞作用，检测细胞下游信号PLC-γ1的变化；用缺乏肝素结合位点的VEGFl21作为对照，观察纳米金对血管内皮细胞增殖的影响；用AFM表征纳米金与VEGFl65、VEGFl21作用前后形貌大小变化，以及纳米金与血管内皮细胞作用前后细胞超微结构变化。将H22肝癌接种到Balb/c裸鼠，用或不用纳米金处理作为治疗组和对照组。用免疫组化方法检测肝癌微血管密度。测量肝癌大小、重量。2.构建含小鼠白介素12(mlL-12)双亚基基因的重组腺病毒(AdvmlL-12)，检测重组腺病毒对H22肝癌细胞的感染效率。用ELISA法测定H22细胞中mlL-12蛋白的表达量；观察AdvmlL-12对H22细胞生长的影响。将AdvmlL-12转染的肝癌H22细胞作为实验组，以Adv-EGFP/H22为载体对照组和H22为空白对照组。这些细胞被分批接种到裸鼠肾包膜下，右前肢皮下。用RT-PCR法检测肝癌组织中的VEGF和Ang-2基因的表达；免疫组织化学方法测量肿瘤组织中微血管密度。测量肿瘤大小和重量。比较组间差别，P<0.05为有显著性差异。
结果：
1.体外实验表明，纳米金能够与具有肝素结合位点的bFGF结合；抑制VEGFl65的信号传导；明显抑制VEGFl65促进血管内皮细胞增殖作用。而纳米金对缺乏肝素结合位点的VEGFl21没有抑制作用。
2.裸鼠体内实验发现，用纳米金处理的实验组微血管密度为14.27±1.08，对照组微血管密度为23.5±1.36，实验组微血管密度较对照组明显减少(t=21.694，P<0.01)。实验组肿瘤体积较小，重量较轻，与对照组比较有显著性差异，P<0.05。
3.在近生理条件下，AFM检测到纳米金与VEGF165、VEGF121作用前后血管内皮细胞超微结构变化。当血管内皮细胞处于增殖状态时，细胞表面出现许多大小约数百纳米的颗粒，细胞膜边缘明显延伸，伪足明显延长。相反地，当血管内皮细胞被纳米金抑制时，细胞表面颗粒大为减少，伪足缩短。
4.在.AdvmIL-12感染复数为100、感染时间为2小时情况下，重组腺病毒的转染率为96.41％。实验组细胞上清液中检测到IL-12蛋白的表达量为(89.71±22.05)ng.48h<-1>.10<6>cells<-1>。AdvmIL-12对H22细胞的生长无抑制作用。
5.裸鼠体内实验表明，实验组肝癌组织中IL-12蛋白的表达量明显高于对照组，而实验组VEGF和Ang-2基因的表达弱于对照组。VEGF基因比值分别为：实验组0.886±0.1924，载体对照组1.1744±0.1189，空白对照组1.1874±0.1752，P<0.05。Ang-2基因比值分别为：实验组0.7878±0.1471，载体对照组1.0319±0.1574，空白对照组1.0361±0.1536，P<0.05。实验组肿瘤平均重量、肿瘤体积和肿瘤微血管密度明显少于对照组，差异有显著性。
结论：
1.体外实验表明，纳米金能够抑制VEGF165的信号传导，明显抑制VEGF165促进血管内皮细胞增殖作用。而纳米金对缺乏肝素结合位点的VEGF121没有抑制作用。
2.在裸鼠体内，纳米金通过阻止VEGF165与VEGFR-2结合，抑制H22肝癌血管生成和肝癌生长。
3.AFM探测结果表明，纳米金抑制了VEGF165促血管内皮细胞增殖的作用。
4.AdvmlL-12高效感染H22细胞，对体外培养H22细胞的生长无抑制作用。
5.在缺乏T细胞的裸鼠体内，IL-12通过抑制肝癌组织中VEGF和Ang-2基因的表达，并抑制血管内皮细胞增殖，发挥其抑制H22肝癌血管生成和肝癌生长的作用。
本实验结果将有助于肝癌及其他实体肿瘤的抗血管生成治疗。