表面等离子体共振成像新方法与应用

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表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)是一种物理光学现象,也是一种重要的生物传感分析和成像分析方法(surface plasmon resonanceimaging, SPRi),可拓展为光纤、长程、局域SPR传感等新方法。它们提供了免标记测定方案,可直接测定生物样品而无须事先纯化,理论上能在生理条件下实时、原位、动态测量多肽、蛋白质、核苷酸、糖、病毒、细菌、细胞等各种生物活性物质,特别是测定它们之间的相互作用。但具体实用的操作方法、流程和数据处理仍然很少,还需要发展各种面向具体样品的可推广SPR方法,特别是SPRi方法。为此本论文以糖和抗癌药物研究为重点对象,发展了SPRi的定量分析与动力学测定方法,取得如下进展:  (一)建立抗癌药物-蛋白作用的SPRi同条件比较分析方法。将顺、反铂药物损伤DNA(cisPt-DNA、transPtTz-DNA)、未损伤DNA(DNA1、DNA2)作为探针固定于同一块芯片上,利用SPRi在相同生理条件测定了其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、转录辅助因子4(PC4)的动力学和热力学作用常数,证明HMGB1只与cisPt-DNA有特异性识别作用,其Kd及ΔG分别为(4.09±0.25)×10-6M和(-30.24±0.29) kJ/mol;而PC4与cisPt-DNA和transPtTz-DNA均有识别作用,与cisPt-DNA的Kd和ΔG为(4.22±0.25)×10-7M和(-35.78±0.14) kJ/mol,与transPtTz-DNA的Kd和ΔG为(3.35±0.27)×10-7M和(-36.34±0.26) kJ/mol。研究发现,在15~42℃范围内,HMGB1、PC4与cisPt-DNA和transPtTz-DNA的识别特异性变化不大,可以将研究温度降低到室温,以方便操作。  (二)建立以Cytop为涂层材料的长程SPRi传感膜制备方法。能控制膜厚在数百纳米至微米范围之内,所得涂层能在水溶液中承受超声、浸泡等检验,有良好的使用稳定性。利用所制得涂膜芯片,初步发展了颗粒物特别是癌细胞与aptamer相互作用长程SPRi测定方法。  (三)建立在13nm的纳米金上共价固定羟基化合物的方法。所建方法以氯三嗪为桥联剂,可固定不同羟基化合物特别是各种糖分子,其不用事先进行衍生处理,固定后的糖能保持原有的识别能力。此外还进一步尝试了在光纤上固定金纳米颗粒的方法,初步构造光纤SPR传感装置。
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