Skp2在人晶状体上皮细胞中的表达及与p27的相关性研究

• 作 者: 朱海萍
• 机 构: 中国医科大学
• 出 处: 中国医科大学
• 发表日期: 2008年9期
• 关键词: 白内障

目的：
白内障是全球第一位致盲眼病，在全球4000万-5000万盲人中，因白内障致盲者约占46％。当前治疗白内障的主要手段是手术摘除混浊的晶状体，但术后晶状体后囊混浊即后发性白内障(以下简称后发障)的发生，会使术后提高的视力再度下降，影响手术效果。后发障在成人术后发生率为30-50％，在儿童则为100％。因此，后发障的防治一直受到人们的关注。目前组织病理学已证实残留的前囊膜或赤道部晶状体上皮细胞增生、向后囊移行并化生是后发障发生的主要原因，所以预防后发障的发生就要控制残留晶体上皮细胞的增殖。
晶状体上皮细胞增殖同样依循细胞周期进行。泛素蛋白酶体途径是真核细胞内重要的蛋白质质控系统，参与调节细胞周期进程、细胞增生与分化，以及信号传导等多种细胞生理过程。Skp2是细胞从G1期进入S期的必需因子，是DNA复制所必需的人类F-box蛋白家族成员，主要通过泛素蛋白酶体降解途径，对多种靶蛋白泛素化降解从而与细胞周期调控细胞增殖密切相关。
目前国内外未见Skp2在晶状体上皮细胞的表达及对细胞增殖影响的报道，也未发现在细胞增殖过程中Skp2与p27kip1关系的报道。对晶状体上皮细胞中Skp2表达及增殖过程中Skp2与p27kiP1关系的研究为从细胞周期调控角度阻止晶状体上皮细胞的增殖，防止后发性白内障发生的进一步研究有着重要的价值。
方法：
1、细胞爬片
分别将人晶状体上皮细胞按每孔1×106细胞数接种于6孔板内，将盖玻片铺于孔底，使细胞在玻片上贴壁生长。将含有不同浓度(1μg·1-1、10μg·1-1、100μg·1-1)
bFGF的10％胎牛血清1640培养液以每孔2.5ml加入，对照组加入含等体积PBS的10％胎牛血清1640培养液2.5ml。37℃，5％CO2、饱和湿度的恒温孵箱中培养48h。
2、免疫细胞化学
将制成的爬片小心取出，PBS清洗，冰丙酮(4℃)固定。采用免疫细胞化学的方法检测Skp2在晶状体上皮细胞的表达。
3、图像采集
应用HPIAS1000高清晰度彩色病理分析系统，将染色的细胞爬片在镜下统一放大400倍，每张爬片随机选取不相重叠的10个视野，用鼠标描绘所测细胞阳性区域，计算机自动进行测量，获得每张爬片的积分光密度值(Integrated OD Average)。
4、统计学分析
统计学分析采用单因素方差分析以及Spearman等级相关分析，所有资料均在SPSS 10.0软件下操作，检验水准α=0.05。
结果：
1、免疫细胞化学SABC法检测人晶状体上皮细胞上Skp2的表达
细胞爬片的人晶状体上皮细胞上均可检测Skp2，p27kip1，PCNA蛋白的存在。Skp2和PCNA为细胞核棕黄色着色，p27kip1于细胞核及细胞浆上均可见棕黄色颗粒沉积。
2、图像分析结果
通过测出积分光密度值I.O.D比较发现除1μg/l组Skp2的P值为0.089外，其余各组加入不同浓度bFGF培养的Skp2，p27kip1，PCNA的蛋白表达与它们空白对照组均有显著性差异。
3、相关性分析结果
晶状体上皮细胞增殖过程中Skp2的蛋白表达程度与PCNA的蛋白表达有明显正相关性，(r=0.706，P<0.05)，p27kip1的蛋白表达程度与PCNA的蛋白表达有明显负相关性，(r=-0.668，P<0.05)，p27kip1和Skp2之间呈显著的负相关关系(r=-0.679。P<0.05)。
结论：
1.人晶状体上皮细胞中可见Skp2的表达。
2.Skp2随bFGF浓度的增加表达增强。
3.在增殖过程中Skp2的表达与PCNA呈正相关，与p27kip1呈负相关。