【摘 要】
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目的：本试验应用阿托伐他汀来干预肺纤维化模型大鼠的肺成纤维细胞以及由转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程，观察该药对细胞增殖的影响，以及对肌成纤维细胞的标志α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响，并应用实时荧光定量RT-PCR技术测定药物对细胞内信号蛋白Smad-3mRNA含量的影响，从而了解阿托伐他汀抗大鼠肺纤维化作用，并进一步探究其作用机制。方法：选
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目的：本试验应用阿托伐他汀来干预肺纤维化模型大鼠的肺成纤维细胞以及由转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程，观察该药对细胞增殖的影响，以及对肌成纤维细胞的标志α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响，并应用实时荧光定量RT-PCR技术测定药物对细胞内信号蛋白Smad-3mRNA含量的影响，从而了解阿托伐他汀抗大鼠肺纤维化作用，并进一步探究其作用机制。
方法：选用雌性Wistar大鼠(体重150-170g)分为两组，每组两只，试验组大鼠给予一次性气管内注入博莱霉素溶液(5mg/Kg体重)建立肺纤维化模型，对照组大鼠给予等量生理盐水。手术后在原条件下继续饲养一周后无菌条件下取鼠肺，应用消化法于DMEM培养基中进行成纤维细胞的分离培养，自然法纯化，传代至第四代始，以成纤维细胞内波形蛋白为目标对细胞进行免疫细胞化学染色，同时应用形态学方法来鉴定细胞。选取0、0.1、1、5、10μM五个浓度剂量的阿托伐他汀分别对试验组细胞进行干预，应用MTT法连续七天测定细胞增殖情况，绘制生长曲线；对照组、试验组细胞又分别分出无干预因素组、TGF-β1单独干预组、TGF-β1联合不同浓度药物干预组，仍然应用MTT法观察药物对细胞增殖的抑制情况；SP法对细胞进行免疫细胞化学染色，观察药物对肌成纤维细胞标志物α-SMA表达的影响；荧光定量RT-PCR技术测定药物对细胞内信号蛋白Smad3mRNA含量的影响。结果：
1大鼠肺成纤维细胞的原代培养及纯化经纯化传代后，成纤维细胞形态单一，胞体较大，均大致呈梭形，均有细长纤维丝。胞浆清晰。与博莱霉素试验组细胞相比，生理盐水对照组细胞胞体略小，开始时生长较缓慢，随着代数增高生长逐渐变快。而博莱霉素组细胞胞体较大，形状也不如盐水组细胞规则，有一些胞突，核浆比例高，生长速度明显快于对照组。
2成纤维细胞的鉴定形态学鉴定：所培养细胞在光镜下呈典型的梭形，胞体狭长、透亮，胞浆丰富，胞膜清晰。经波形蛋白免疫细胞化学染色(SP法)鉴定，阳性细胞计数，实验组及对照组成纤维细胞均可达95％以上。
3阿托伐他汀对纤维化大鼠肺成纤维细胞增殖的影响应用重复测量设计资料方差分析可知，各剂量组中不同干预天数所测得的OD值之间存在显著差异(P＜0.01)。各时间点所测0D值与不同用药物剂量之间存在交互作用(P＜0.01)。各剂量组对细胞的抑制作用之间存在显著差别(P＜0.01)。
4阿托伐他汀对TGF-B1诱导的肌成纤维细胞增殖的影响无论是博莱霉素实验组还是生理盐水对照组的药物因素对肺成纤维细胞增殖均有影响(P＜0.01)，事后两两比较显示两组细胞中除无干预因素组与1μM药物组、FGF-β1单独诱导组与0.1μM药物组OD值之间无差异(P＞0.05)之外，其余各组两两互比差异均有统计学意义(P＜0.01)。区组因素对细胞OD值有影响，实验组OD值较对照组要高(P＜0.01)。 5阿托伐他汀对TGF-β1诱导的大鼠肺肌成纤维细胞标志性产物α-SMA表达的影响免疫细胞化学染色结果显示无论对于实验组还是对照组，药物因素对α-SMA的表达量(灰度值)都有影响(P＜0.01)。各剂量组之间α-SMA的表达量差别有统计学意义(P＜0.01)。区组因素对α-SMA的表达量有影响，实验组α-SMA的表达量较对照组要高(P＜0.01)。
6阿托伐他汀对TGF-β1诱导的大鼠肺肌成纤维细胞内信号蛋白Smad3mRNA表达量的影响实时荧光定量RT-PCR结果显示：无论是博莱霉素实验组还是生理盐水对照组的药物因素对Smad3mRNA表达量均有影响(P＜0.01)，事后两两比较显示：无干预因素组与5μM药物组、0.1μM与TGF-β1单独组、1μM与0.1μM药物组Smad3mRNA表达量差异无统计学意义(P＞0.05)。实验组与对照组细胞Smad3mRNA表达量相比差异无统计学意义(P＞0.05)。
结论：1肺纤维化大鼠肺组织内成纤维细胞与正常肺组织内成纤维细胞相比具有表型轻度分化和增殖速度快的特点。2阿托伐他汀能够抑制肺纤维化大鼠肺成纤维细胞的增殖。3该药同时能够抑制TGF-β1诱导的肌成纤维细胞的分化，这主要表现在抑制细胞生长增殖、改变细胞形态、减少肌成纤维细胞的标志性产物α-SMA的产生上。4阿托伐他汀可通过抑制细胞内信号蛋白Smad3mRNA的表达来影响’TGF-β1诱导的成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化。
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