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松材线虫病(Pine wilt disease)是松属植物(.Pinus)的毁灭性病害,目前,大多数林病学者认为松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是引起松树萎焉的主导因素,但与松材线虫密切相关的细菌在松材线虫病中所扮演的角色,一直是热点问题,本文对松材线虫病相关细菌展开比较全面的调查,同时对细菌与松材线虫、松材线虫病的相互关系进行初步的研究,主要取得以下研究结果:
1.本试验共筛选到松材线虫相关伴生细菌331株,松材线虫内生菌64株。通过细菌的形态学观察,结合16S rDNA基因PCR扩增测序,共鉴定出细菌20种,其中以巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、蜡质芽孢杆菌(B.cereus)、短小芽孢杆菌(B. pumilus)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)等芽孢杆菌属的细菌出现频率较高,为优势种群。运用BIOLOG细菌自动鉴定系统鉴定3株细菌,鉴定结果为边缘假单胞菌(置信度98%)、短小芽孢杆菌(置信度99%)和蜡质芽孢杆菌(置信度98%)。鉴定结果与16S rDNA基因PCR扩增测序鉴定结果一致,同时也验证了细菌分子鉴定的可靠性。从各发病区采得的健康的马尾松均无线虫蠕动的轨迹,偶尔在木块周围可分离到巨大芽孢杆菌,其它菌株未曾发现。
2.本文研究松材线虫伴生细菌对松材线虫的影响,结果表明:高浓度的巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescent)较明显的促进松材线虫的繁殖。首次在松材线虫中发现一株对线虫具有较高杀虫活性的边缘假单胞菌(P. marginalis),该菌株在9×10<9>CFU以上的浓度时对松材线虫表现出较高的杀虫活性,24小时的校正死亡率可达70%以上,而对Panagrellus redivivu表现出的杀虫活性更强,处理24小时后,死亡率达100%。
3.为研究松材线虫伴生细菌与松材线虫病的关系,本试验将出现频率较高的细菌分4个处理接种于马尾松(P.massoniana)的水培苗中,结果发现巨大芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和荧光假单胞与松材线虫的混合液接种后,松枝出现不同程度的发病,松枝从发病到枯死大约为15天,感病马尾松松枝发病过程是:接种枝——主枝——侧枝——新梢,单独接种细菌,单独接种松材线虫,接种菌液、松材线虫与抗生素的混合液及对照均未见发病,48天后自然枯死。由此推测,松材线虫所携带的细菌在这一病害过程中起至关重要的作用,细菌与松材线虫二者在松材线虫病的发生中均为不可缺少的因素。