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目的：利用新金分枝杆菌建立C57BL/6小鼠非结核分枝杆菌持续感染模型，在感染后Treg表型变化明显的时间点继发感染鼠伤寒沙门氏菌，分析感染小鼠体内的免疫细胞、细胞因子和组织病理随感染时间的动态变化，为分析非结核分枝杆菌感染后引起的其他病原菌的共感染导致机体免疫损伤状况提供理论依据。
方法：建立M.neoaurum感染小鼠巨噬细胞RAW264.7模型，对感染M.neoaurum组的细胞继发感染Salmonellatyphimurium。试验设新金分枝杆菌组、沙门氏菌组、新金与沙门共感染菌组及PBS对照组。流式细胞术检测各组小鼠巨噬细胞凋亡率的变化；测定各试验组感染RAW264.7细胞后CD80、CD86表达量的变化；Elisa法检测各试验组相关细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-12、IFN-γ和iNOS表达量的变化。制备感染动物模型，本研究将M.neoaurum腹腔注入6周龄C57BL/6小鼠，在感染后第六周口服灌胃Salmonellatyphimurium，分析新金分枝杆菌感染对继发感染沙门氏菌的影响。试验分组如下：新金分枝杆菌组、沙门氏菌组、新金分枝杆菌与沙门氏菌共感染组及PBS对照组。记录感染后各组小鼠体重和存活率、器官指数；无菌采取感染鼠的肺脏、脾脏和盲肠制备病理组织切片并观察病理组织学变化；通过荧光定量PCR检测脾脏中iNOS表达量的变化；采用流式细胞术检测感染后不同时间点(3、6、9、12、15天)脾脏中CD3+CD4+、CD3+CD8+及CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞亚型的表达变化。
结果：RAW264.7细胞在感染新金分枝杆菌后继发感染沙门氏菌，会促进iNOS、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-12炎性因子的分泌，M.neoaurum+S.Typhimurium组会发生更强的炎性反应，刺激RAW264.7细胞分泌更多的炎性因子，加强巨噬细胞的杀伤功能，增强机体的防御方应。M.neoaurum+S.Typhimurium组相比于S.Typhimurium组凋亡率有显著提高(P＜0.01)。在感染初期6h时，各感染组的RAW264.7细胞表面协同刺激分子CD80/86的表达量都明显增加，且共感染组(M.neoaurum+S.Typhimurium)表达量相比于M.neoaurum组和S.Typhimurium组明显增加(P＜0.01)，增强了RAW264.7细胞的抗原提呈能力，免疫应答处于增强趋势。在感染后期12h，各感染组巨噬细胞CD80/86的表达量均有所下降，且共感染组(M.neoaurum+S.Typhimurium)相比于S.Typhimurium组下降的程度较明显(P＜0.05)，CD86+的分泌无明显差异，也可说明细菌为抵抗Mφ的杀菌作用而抑制细胞表面协同刺激分子CD80/86的表达，抑制细胞清除细菌的能力。M.neoaurum+S.Typhimurium共感染组小鼠体重相比其他组有明显下降趋势且M.neoaurum+S.Typhimurium组相比于M.neoaurum、S.Typhimurium组死亡率明显升高。M.neoaurum+S.Typhimurium共感染组小鼠脾脏、盲肠、肺脏产生明显的病理组织学损伤。荧光定量PCR检测脾脏中iNOS表达量随时间的变化，各感染组在第3、6、9天iNOS的mRNA表达量均增加并高于PBS组，在第6天，M.neoaurum+S.Typhimurium组iNOS的mRNA表达量最高，高于M.neoaurum组和S.Typhimurium组，在感染第6天之后，各感染组iNOS的mRNA表达有所下降，与PBS组相比无明显差异。流式细胞术检测感染后不同时间点(3、6、9、12、15天)脾脏中CD3+CD4+、CD3+CD8+及CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞亚型的表达变化。感染第3天时，各感染组脾脏CD3+CD4+细胞比例达到最高，随着时间增加，各感染组脾脏CD3+CD4+细胞比例逐渐下降，并低于PBS组，在第12天M.neoaurum+S.Typhimurium组CD3+CD4+细胞比例达到最低，且显著低于M.neoaurum组和S.Typhimurium组，随后各实验组之间无明显差异。相比于小鼠脾脏CD3+CD8+T淋巴细胞随时间的变化，感染初期第3天，各组无明显差异，感染第6天，各感染组脾脏CD3+CD8+T淋巴细胞均下降且M.neoaurum+S.Typhimurium组达到最低，随着时间延长，各感染组脾脏CD3+CD8+T淋巴细胞有增加现象且在第12天M.neoaurum+S.Typhimurium组小鼠脾脏CD3+CD8+T淋巴细胞比例达到最高，随后逐渐恢复平稳。M.neoaurum+S.Typhimurium组Treg细胞比例持续升高并在第6天达到最高，且远高于M.neoaurum组和S.Typhimurium组，强烈抑制了相关对抗NTMs的免疫反应，导致小鼠抵抗能力下降，死亡率升高。
方法：建立M.neoaurum感染小鼠巨噬细胞RAW264.7模型，对感染M.neoaurum组的细胞继发感染Salmonellatyphimurium。试验设新金分枝杆菌组、沙门氏菌组、新金与沙门共感染菌组及PBS对照组。流式细胞术检测各组小鼠巨噬细胞凋亡率的变化；测定各试验组感染RAW264.7细胞后CD80、CD86表达量的变化；Elisa法检测各试验组相关细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-12、IFN-γ和iNOS表达量的变化。制备感染动物模型，本研究将M.neoaurum腹腔注入6周龄C57BL/6小鼠，在感染后第六周口服灌胃Salmonellatyphimurium，分析新金分枝杆菌感染对继发感染沙门氏菌的影响。试验分组如下：新金分枝杆菌组、沙门氏菌组、新金分枝杆菌与沙门氏菌共感染组及PBS对照组。记录感染后各组小鼠体重和存活率、器官指数；无菌采取感染鼠的肺脏、脾脏和盲肠制备病理组织切片并观察病理组织学变化；通过荧光定量PCR检测脾脏中iNOS表达量的变化；采用流式细胞术检测感染后不同时间点(3、6、9、12、15天)脾脏中CD3+CD4+、CD3+CD8+及CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞亚型的表达变化。
结果：RAW264.7细胞在感染新金分枝杆菌后继发感染沙门氏菌，会促进iNOS、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-12炎性因子的分泌，M.neoaurum+S.Typhimurium组会发生更强的炎性反应，刺激RAW264.7细胞分泌更多的炎性因子，加强巨噬细胞的杀伤功能，增强机体的防御方应。M.neoaurum+S.Typhimurium组相比于S.Typhimurium组凋亡率有显著提高(P＜0.01)。在感染初期6h时，各感染组的RAW264.7细胞表面协同刺激分子CD80/86的表达量都明显增加，且共感染组(M.neoaurum+S.Typhimurium)表达量相比于M.neoaurum组和S.Typhimurium组明显增加(P＜0.01)，增强了RAW264.7细胞的抗原提呈能力，免疫应答处于增强趋势。在感染后期12h，各感染组巨噬细胞CD80/86的表达量均有所下降，且共感染组(M.neoaurum+S.Typhimurium)相比于S.Typhimurium组下降的程度较明显(P＜0.05)，CD86+的分泌无明显差异，也可说明细菌为抵抗Mφ的杀菌作用而抑制细胞表面协同刺激分子CD80/86的表达，抑制细胞清除细菌的能力。M.neoaurum+S.Typhimurium共感染组小鼠体重相比其他组有明显下降趋势且M.neoaurum+S.Typhimurium组相比于M.neoaurum、S.Typhimurium组死亡率明显升高。M.neoaurum+S.Typhimurium共感染组小鼠脾脏、盲肠、肺脏产生明显的病理组织学损伤。荧光定量PCR检测脾脏中iNOS表达量随时间的变化，各感染组在第3、6、9天iNOS的mRNA表达量均增加并高于PBS组，在第6天，M.neoaurum+S.Typhimurium组iNOS的mRNA表达量最高，高于M.neoaurum组和S.Typhimurium组，在感染第6天之后，各感染组iNOS的mRNA表达有所下降，与PBS组相比无明显差异。流式细胞术检测感染后不同时间点(3、6、9、12、15天)脾脏中CD3+CD4+、CD3+CD8+及CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞亚型的表达变化。感染第3天时，各感染组脾脏CD3+CD4+细胞比例达到最高，随着时间增加，各感染组脾脏CD3+CD4+细胞比例逐渐下降，并低于PBS组，在第12天M.neoaurum+S.Typhimurium组CD3+CD4+细胞比例达到最低，且显著低于M.neoaurum组和S.Typhimurium组，随后各实验组之间无明显差异。相比于小鼠脾脏CD3+CD8+T淋巴细胞随时间的变化，感染初期第3天，各组无明显差异，感染第6天，各感染组脾脏CD3+CD8+T淋巴细胞均下降且M.neoaurum+S.Typhimurium组达到最低，随着时间延长，各感染组脾脏CD3+CD8+T淋巴细胞有增加现象且在第12天M.neoaurum+S.Typhimurium组小鼠脾脏CD3+CD8+T淋巴细胞比例达到最高，随后逐渐恢复平稳。M.neoaurum+S.Typhimurium组Treg细胞比例持续升高并在第6天达到最高，且远高于M.neoaurum组和S.Typhimurium组，强烈抑制了相关对抗NTMs的免疫反应，导致小鼠抵抗能力下降，死亡率升高。