论文部分内容阅读
目的： 探讨TNF-α是否通过调控Mdr和/或Mrp2进而导致肝脏胆汁淤积;并通过抗TNF-α单克隆抗体干预实验和Tnfr-/-小鼠PNAC模型，研究其能否通过调控上述基因表达防止PN相关肝损害。 方法： 将雄性6-8周龄C57BL/6J野生型小鼠30只随机分为3组:TPN+mAb(抗TNF-α单克隆抗体)组、PN1组和对照1组（对照组），每组10只;将雄性6-8周龄Tnfr-/-小鼠20只随机分为PN2组和对照2组（对照组）。小鼠麻醉后行颈静脉插管，使用自制旋转输液装置，微泵持续24小时输注营养液或生理盐水。7天后过量麻醉处死，取血样和肝组织标本。进行血清肝功能指标分析、TNF-α及其受体TNFR浓度测定;肝组织病理检查、肝组织样本TNF-α及其受体Tnfr、Mdr1、Mdr2与Mrp2mRNA和蛋白表达检测。 实验研究分为以下三个部分: 1.TPN所致肝损害小鼠模型建立，作为整个研究的基础。 2.抗TNF-α单克隆抗体防治小鼠PN相关肝损害的实验研究，应用TNF-α抗体验证TNF-α在PN相关肝损害发病机制中的作用。 3.TnfrⅠ基因敲除小鼠PN治疗后的肝Mdr1、Mdr2和Mrp2表达及意义，从而探讨TnfrⅠ基因缺失对PN相关肝损害的保护意义。 结果： 野生型小鼠PN1组的血清转氨酶(ALT，AST)、直接胆红素(Dbi1)和胆汁酸(BA)水平明显高于对照组，提示存在PNAC早期病变，且小鼠肝Mdr1、Mdr2与Mrp2表达下降。加用抗TNF-α单克隆抗体的PN组小鼠血清指标更接近正常，小鼠肝Mdr1、Mdr2与Mrp2表达上升，同时TnfrⅠ基因表达增强。Tnfr-/-小鼠经肠外营养7天后，没有出现PNAC病理和生化改变，也没有显著的肝Mdr1、Mdr2与Mrp2表达改变。 1.TPN所致肝损害小鼠模型建立: TPN组的ALT、AST、Dbi1和BA水平显著高于对照组(P＜0.05)，病理学检查显示TPN组出现肝细胞变性坏死、胆汁淤积，但两组间病理评分无统计学差异。 2.抗TNF-α单克隆抗体防治小鼠PN相关肝损害的实验研究:PN1组小鼠的ALT、AST、Dbi1和BA水平显著高于对照组(P＜0.05)，提示存在胆汁淤积早期改变;而抗TNF-α单克隆抗体（英夫利昔）的应用可改善PN小鼠血清Dbi1和白蛋白(ALB)水平，两组指标的差异有显著性(P＜0.05)，此外，TPN+mAb组小鼠血清ALT和BA也低于PN组小鼠，但差异不显著。同时，PN1组小鼠肝组织Mdr1、Mdr2和Mrp2mRNA表达明显低于对照组(P＜0.05)，而TPN+mAb组小鼠肝组织Mdr1、Mdr2和Mrp2mRNA表达较PN1组有改善，两组之间的差异有显著性(P＜0.05)。 3.TnfrⅠ基因敲除小鼠PN应用的肝Mdr1、Mdr2和Mrp2表达及意义:Tnfr-/-小鼠PN组的肝大体形态基本正常，无肝细胞变性坏死及胆汁淤积;血清ALT、ALB、Tbi1、Dbi1和BA水平，肝Mdr1、Mdr2、Mrp2mRNA表达，以及肝TNF-α基因和蛋白表达与同质对照组小鼠无显著差异(P＞0.05)。PN2组（Tnfr-/-）小鼠与PN1组（野生型）比较，PN2组小鼠血清ALT和BA明显低于PN1组，而ALB浓度明显高于PN1组;PN2组小鼠肝Mdr2、Mrp2mRNA表达略高于PN1组。 结论： 野生型PN小鼠肝组织Mdr1、Mdr2与Mrp2表达发生变化，这有助于研究PN相关肝损伤的分子机制。而这种变化在Tnfr-/-小鼠中则不明显，提示TNF-α及其受体可能通过调控肝Mdr1、Mdr2与Mrp2的表达对PNALD的发病产生影响。而抗TNF-α单克隆抗体（英夫利昔）在防治PNALD方面有应用前景，在投入临床并推广前，尚需扩大观察样本量，进一步证实安全性和适用时机。 1.小鼠TPN组与常见于婴幼儿的PNAC早期血清学检查结果相似，从而为PNALD分子水平研究确立动物模型载体。 2.抗TNF-α单克隆抗体（英夫利昔）通过上调肝细胞ABC转运蛋白家族基因表达改善PNALD病变，该药应用于临床PNALD的安全性和有效性尚需更全面的实验验证。 3.TNFRⅠ基因缺失对PN相关肝损伤的发生发展起保护作用，其机制可能与肝Mdr2、Mrp2基因表达上调，从而改善肝细胞小管膜侧转运功能有关，具体作用环节尚待进一步阐明。