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目的：药物遗传毒性安全性评价主要是通过不同试验方法的组合，研究受试药物对机体中遗传物质是否具有损伤作用，从而对受试药物进行潜在致癌性的预测，降低临床用药的风险。我国食品药品监督管理局撰写的《药物遗传毒性研究技术指导原则》主要针对化学药物，而中药的特殊理化性质可能导致指导原则中推荐的试验组合方法无法科学的反映受试药物的毒性。为此我们提出了在部分体外试验无法进行的情况下，进行小鼠骨髓细胞微核试验和彗星试验、仓鼠体内染色体畸变试验以及利用多次给药长期毒性试验动物进行微核试验和彗星试验的新的遗传毒性评价试验组合方法。本研究以商陆为载体，对《指导原则》中推荐的标准试验组合和我们早期建立的中药遗传试验组合方法进行比较，进一步确认新的试验组合作为中药遗传毒性评价方法的优点，并评价商陆的遗传毒性。 1.商陆遗传毒性试验研究--按照《药物遗传毒性研究技术指导原则》中推荐的标准试验组合 方法：按照《指导原则》中推荐的标准试验组合，对商陆水煎液进行商陆的鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)、CHL体外染色体畸变试验和小鼠骨髓细胞的微核试验。 结果：Ames试验中商陆水煎液由于色素、不溶性颗粒物等诸多影响因素干扰，导致试验无法进行计数，说明商陆水煎液不适用该试验方法进行检测。CHL细胞染色体畸变试验虽然结果判定阴性，但实验中也发现一些因素的干扰。小鼠骨髓细胞微核试验未显示商陆水煎液有潜在的遗传毒性。 2.商陆遗传毒性试验研究--针对中药特点新的遗传毒性试验组合 方法：针对中药水煎剂的特殊理化特点，我们用小鼠骨髓细胞微核试验和彗星试验、仓鼠体内染色体畸变试验以及模拟多次给药长期毒性试验动物进行微核试验和彗星试验的新的遗传毒性评价试验组合对商陆进行研究。 结果：商陆水煎液经口灌胃给药的小鼠骨髓细胞微核试验和彗星试验、仓鼠骨髓细胞染色体畸变试验中各剂量组试验结果与阴性对照组相比，无显著差异。商陆水煎液连续给药14d在达到18g·kg-1(相当于人临床用量的10倍)和27g·kg-1剂量时，小鼠骨髓细胞和外周血红细胞微核率、骨髓细胞的拖尾阳性率和拖尾长度就明显增加，与阴性对照组比较，均有显著差异(P<0.01)，并有一定的量效关系，表明延长给药时间可充分暴露药物潜在的遗传毒性。 3.商陆遗传毒性成分的初步分析 方法：用传统的中药水煎方法制备的商陆水煎剂和经氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取后的商陆水提物分别用HPLC方法进行商陆皂苷甲含量测定和灌胃给药14d进行小鼠微核试验和彗星试验，探讨分析商陆皂苷甲含量与遗传毒性的关系。 结果：商陆水煎剂和商陆水提物在18g·kg-1以上剂量时小鼠骨髓细胞和外周血红细胞微核率、骨髓细胞彗星拖尾阳性率和拖尾长度均有明显上升，与阴性对照组比较，有显著统计学意义。而同样1g(生药)·kg-1，商陆水煎液皂苷甲含量为0.61mg·kg-1，商陆水提物皂苷甲含量却只有6.66μg·kg-1，两者商陆皂苷甲含量相差90倍。由于商陆的化学成分众多，无法一一进行遗传毒性分析，但上述结果提示商陆皂苷甲可能不是引起遗传毒性的主要成分。 结论：用中药水煎剂进行遗传毒性评价时，当用推荐的标准组合试验中的体外试验因各种因素干扰不能正常进行时，采用针对中药特点新的遗传毒性试验组合，增加体内试验、结合反复给药毒性试验的方法进行遗传毒性评价，证明了方法的可行性和有效性。