人防御素HNP-1基因转染对裸鼠鼻咽癌移植瘤生长影响的实验研究

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目的:(1)观察人α-防御素HNP-1基因对人鼻咽癌细胞株HNE-1生长的影响,探讨其在裸鼠鼻咽癌移植瘤生长中的作用。(2)研究人鼻咽癌组织中α-防御素1的表达及其临床意义。 方法:(1)通过RT-PCR证实人鼻咽癌HNE-1细胞中没有HNP-1基因的表达,将HNP-1基因通过脂质体介导转染人鼻咽癌HNE-1细胞,PI、MTT实验观察对HNE-1的细胞毒性作用,将筛选的含pcDNA3.1(+)-HNP-1质粒的HNE-1细胞和空pcDNA3.1(+)质粒的HNE-1细胞以及单纯的HNE-1细胞培养、收集后分别注射于6周龄雌性BALB/c裸鼠的右侧腹壁(flank)皮下,观察肿瘤生长速度,免疫组织化学检测α-防御素1在BALB/c裸鼠肿瘤组织中的表达。(2)取人鼻咽癌组织68例,其中鼻咽低分化癌64例,高分化癌4例。按照根据国际抗癌联盟(UICC)头颈肿瘤的临床分类分期第六版(2002)标准:Ⅰ期10例、Ⅱ期20例、Ⅲ期30例、Ⅳ期8例。免疫组化检测α-防御素1的表达,研究其与鼻咽癌患者的性别、年龄、临床分期、病理类型的相关性。 结果:(1)HNP-1基因转入鼻咽癌HNE-1细胞后能成功地表达有活性的α-防御素1,PI、MTT。实验证实有细胞毒作用,转染HNP-1基因组裸鼠较对照组肿瘤生长速度慢,体积小,差异有统计学意义。免疫组织化学显示pcDNA3.1(+)-HNP-1组部分癌细胞胞浆染色阳性,表明有α-defensinl蛋白表达,pcDNA3.1(+)和单纯HNE-1细胞组癌细胞染色阴性。(2)68例鼻咽癌患者中癌细胞灶性着色阳性26例、阴性42例,比例38.2%。鼻咽癌细胞灶性着色阳性组:男20人,女6人,男/女为3.3。年龄最大65岁,最小40岁,平均49.95岁,临床分期:Ⅰ期4例、Ⅱ期12例、Ⅲ期14例、Ⅳ期6例。4例鼻咽高分化鳞癌患者显示肿瘤细胞灶性着色。鼻咽癌细胞灶性着色阴性组:男30人,女12人男/女为2.5。年龄最大65岁,最小27岁,平均50.03岁。临床分期:Ⅰ期6例、Ⅱ期8例、Ⅲ期16例、Ⅳ期2例。 结论:(1)通过转基因方法能表达有活性的α-防御素1并能抑制裸鼠鼻咽癌移植瘤的生长。(2)鼻咽癌患者鼻咽肿瘤组织的α-防御素1的表达与患者的性别、年龄、临床分期没有明显的相关性,与肿瘤的病理类型有关,高分化癌的灶性表达率较高。由于本组资料没有追踪患者的预后,无法说明α-防御素的灶性表达是否与患者的预后有关。
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