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狂犬病是一种引起的致死性中枢神经系统感染的人兽共患传染病，每年全世界大约有60，000人死于该病。反向遗传操作技术为新型基因工程疫苗开辟了全新的领域，本研究利用已建立的狂犬病病毒反向遗传操作技术平台，成功获得嵌合狂犬病病毒HEP—dG。并对重组病毒HEP—dG株的生物学特性进行了研究，并与其亲代病毒rHEP—Flury相比较，HEP—dG株经BHK—21细胞驯化后，能在该细胞上大量稳定增殖，37℃培养4d，病毒滴度可达8.0×107FFU/mL，比亲代毒株滴度高约10～100倍；利用细胞线粒体呼吸作用分析感染病毒后细胞的活力，随着感染天数的增加和病毒滴度的升高，HEP—dG株的复制效率高于亲代病毒rHEP—Flury株，其活细胞数也高于rHEP—Flury株，细胞毒素影响病毒在细胞中的复制效率进而影响病毒的滴度；病毒致病性的研究结果表明，狂犬病病毒HEP—dG株和rHEP—Flury株仅对未成年鼠有致病力：不导致成年鼠死亡，仅轻微影响其体重变化，并且携带双G基因的HEP—dG株是较亲代病毒rHEP—Flury株更弱的病毒株。
⑴根据薄层扫描分析，并通过Western blotting检测，HEP—dG株表达的G蛋白是亲代病毒rHEP—Flury株G蛋白的1.83倍；对病毒免疫原性的研究，以HEP—dG株为灭活疫苗能诱导动物产生较高的抗体水平，HEP—dG株诱导鼠的抗体滴度大约是亲代毒株rHEP—Flury株诱导抗体滴度的1.2～2倍，而且HEP—dG株诱导犬的抗体滴度大约是亲代毒株rHEP—Flury株诱导抗体滴度的2倍。
⑵利用通过反向遗传操作系统拯救的HEP—dG株，经β—丙内酯灭活，制备成六种不同的佐剂制成灭活疫苗进行免疫效果的比较试验：HEP—dG株的五种佐剂疫苗和某进口疫苗都能诱导较高的抗体水平，而Montanide ISA780 VG佐剂疫苗对小鼠免疫失败，未能诱导小鼠产生抗体；并筛选出一种既对犬副作用小，又能诱导较高抗体水平的佐剂疫苗—ESSAL GEL佐剂疫苗免疫健康犬，犬免疫后狂犬病病毒中和抗体水平逐渐增加，而且佐剂为ESSAL GEL的HEP—dG株疫苗诱导的抗体滴度与某进口疫苗诱导抗体的滴度基本一致。
⑶利用反向遗传操作技术，构建了携带绿色荧光蛋白(GFP)的狂犬病病毒HEP—Flury株全长基因组cDNA质粒，并成功拯救能表达GFP的嵌合病毒HEP—GFP株；并以携带绿色荧光蛋白基因的嵌合狂犬病病毒HEP—GFP株为基础毒株，建立了一种新型快速荧光斑点抑制实验(RFFIT—GFP)；并对多份人、犬、猫的血清进行了检测，还将该检测结果与传统的RFFIT，ELISA相比较：RFFIT—GFP和RFFIT，ELISA测定的结果基本相一致，特异性都比较高。
⑷通过对HEP—dG株与亲代病毒进行生物学特性比较：携带两个G基因的HEP—dG株比亲代病毒病毒滴度高、致病性低、免疫原性高，为开发新型基因疫苗提供了良好的疫苗候选株；并以携带绿色荧光蛋白的狂犬病病毒HEP—GFP株为基础毒株，建立一种新型快速的荧光斑点抑制实验(RFFIT—GFP)，为建立一种简便、快速、经济的狂犬病病毒的检测方法奠定基础。