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随着社会经济的发展，糖尿病(Diabetes mellitus,DM)为代表的代谢性疾病患病率逐年上升，男性糖尿病患者并发勃起功能障碍的发病率约三倍于普通人群1-14，并且比普通人群要早10～15年发病，针对其发病机制及防治的研究十分有必要，因此我们通过建立DMED大鼠模型研究阴茎海绵体组织内VEGF系统功能的变化，再构建慢病毒-VEGF165载体后转染入脂肪组织来源的干细胞(ADSCs)作为治疗DMED的种子细胞进行细胞移植入DMED大鼠体内观察其疗效。本研究分为三个部分：
第一部分：糖尿病性勃起功能障碍大鼠模型的建立及阴茎海绵体组织内VEGF系统的变化。
目的：探讨链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法建立糖尿病勃起功能障碍动物模型的可行性，以及测定阴茎海绵体组织内VEGF系统功能的变化。
方法：实验组SD雄性大鼠分三组(组1、2、3)，分别腹腔注射35mg/kg、40mg/kg、60mg/kg的STZ；正常对照组。大鼠腹腔注射柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。4d后，快速法测定血糖；10周后，应用阿朴吗啡(APO)100μg/kg皮下注射观察大鼠阴茎勃起情况并筛选ED模型，并分别测定实验各组及正常对照组大鼠平均颈动脉内压(MAP)、阴茎海绵体内压(ICP)，并收集阴茎组织进行免疫组化及Western Blot分析其VEGF系统功能。
结果：实验组中组1糖尿病成模率为87.5％(35/40)，组2和组3成模率均为100％，但组3有17.5％(7/40)的死亡率。实验组血糖明显高于对照组(P＜0.01)，体重、阴茎勃起次数、阳性勃起率及刺激海绵体神经后的ICP值则明显低于正常组(P＜0.01)，实验组间(组1、2、3间)则无明显差异；MAP值在各组间无明显差异。DMED大鼠阴茎海绵体VEGF系统(VEGF，Flk-1，eNOS)免疫组化及WesternBlot分析均明显下降。
结论：腹腔注射STZ诱导糖尿病大鼠最佳注射剂量为40mg/kg，注射STZ后出现典型的糖尿病临床症状，血糖明显增高，ICP下降，勃起功能明显受损，APO筛选试验可有效筛选ED模型。DMED大鼠阴茎海绵体VEGF系统功能异常，为后续研究奠定了理论基础。
第二部份：慢病毒-VEGF165载体的构建以及其在脂肪组织来源的干细胞中的表达。
目的：目前，干细胞已成为基因治疗载体的最佳选择，但是对于脂肪干细胞的相关研究还很少，因此我们打算构建过表达VEGF165的慢病毒载体并对脂肪组织来源干细胞进行感染以期得到用于基因治疗的种子细胞。
方法：通过PCR方法将EHS1001-68950485313912克隆突变成VEGF165(NM_001025368)转录本片段。过表达慢病毒采用三质粒系统(pGC-FU、pHelp1.0和pHelp2.0)进行包装。进行滴度测定后使用构建成功的载体对ADSCs进行感染。通过免疫荧光、western blot和ELISA分析鉴定VEGF165在ADSCs中的表达。
结果：DNA测序和质粒转染293T细胞表达检测证明VEGF165与GFP被成功的构建为融合表达载体。经定时定量PCR检测，得到的病毒滴度达到2×108TU/ml。用过表达VEGF165的慢病毒转染脂肪组织来源干细胞，western blot、ELISA和免疫荧光检测表明基因稳定表达。
结论：本研究通过获得稳定表达VEGF165的脂肪组织来源干细胞为糖尿病性勃起障碍的治疗奠定了基础。
第三部分：经VEGF165基因修饰后的脂肪组织来源的干细胞治疗糖尿病性勃起功能障碍大鼠。
目的：探讨经VEGF165基因修饰后的ADSCs治疗DMED大鼠的有效性。
方法：将实验动物分为五组：A、正常对照组；B、空白(阴性)对照组；C、慢病毒-VEGF165治疗组；D、空白ADSCs治疗组；E、VEGF165-ADSCs治疗组。注射后在不同时间段7天和28天行大鼠阴茎海绵体内压和平均颈动脉压的测定，测压后取其阴茎组织做免疫组化及Western Blot分析。
结果：经过7天和28天治疗后，其ICP、ICP/MAP％、AUC上升明显，在阴茎海绵体内可找到GFP标记的细胞，并且免疫组化及Western Blot分析发现其VEGF系统功能得到一定程度的恢复，表现为VEGF,Flk-1,eNOS表达升高，以E组效果最明显。
结论：经过VEGF165-ADSCs治疗，DMED大鼠受损的勃起功能及VEGF系统功能异常可以得到一定程度的恢复。
第一部分：糖尿病性勃起功能障碍大鼠模型的建立及阴茎海绵体组织内VEGF系统的变化。
目的：探讨链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法建立糖尿病勃起功能障碍动物模型的可行性，以及测定阴茎海绵体组织内VEGF系统功能的变化。
方法：实验组SD雄性大鼠分三组(组1、2、3)，分别腹腔注射35mg/kg、40mg/kg、60mg/kg的STZ；正常对照组。大鼠腹腔注射柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。4d后，快速法测定血糖；10周后，应用阿朴吗啡(APO)100μg/kg皮下注射观察大鼠阴茎勃起情况并筛选ED模型，并分别测定实验各组及正常对照组大鼠平均颈动脉内压(MAP)、阴茎海绵体内压(ICP)，并收集阴茎组织进行免疫组化及Western Blot分析其VEGF系统功能。
结果：实验组中组1糖尿病成模率为87.5％(35/40)，组2和组3成模率均为100％，但组3有17.5％(7/40)的死亡率。实验组血糖明显高于对照组(P＜0.01)，体重、阴茎勃起次数、阳性勃起率及刺激海绵体神经后的ICP值则明显低于正常组(P＜0.01)，实验组间(组1、2、3间)则无明显差异；MAP值在各组间无明显差异。DMED大鼠阴茎海绵体VEGF系统(VEGF，Flk-1，eNOS)免疫组化及WesternBlot分析均明显下降。
结论：腹腔注射STZ诱导糖尿病大鼠最佳注射剂量为40mg/kg，注射STZ后出现典型的糖尿病临床症状，血糖明显增高，ICP下降，勃起功能明显受损，APO筛选试验可有效筛选ED模型。DMED大鼠阴茎海绵体VEGF系统功能异常，为后续研究奠定了理论基础。
第二部份：慢病毒-VEGF165载体的构建以及其在脂肪组织来源的干细胞中的表达。
目的：目前，干细胞已成为基因治疗载体的最佳选择，但是对于脂肪干细胞的相关研究还很少，因此我们打算构建过表达VEGF165的慢病毒载体并对脂肪组织来源干细胞进行感染以期得到用于基因治疗的种子细胞。
方法：通过PCR方法将EHS1001-68950485313912克隆突变成VEGF165(NM_001025368)转录本片段。过表达慢病毒采用三质粒系统(pGC-FU、pHelp1.0和pHelp2.0)进行包装。进行滴度测定后使用构建成功的载体对ADSCs进行感染。通过免疫荧光、western blot和ELISA分析鉴定VEGF165在ADSCs中的表达。
结果：DNA测序和质粒转染293T细胞表达检测证明VEGF165与GFP被成功的构建为融合表达载体。经定时定量PCR检测，得到的病毒滴度达到2×108TU/ml。用过表达VEGF165的慢病毒转染脂肪组织来源干细胞，western blot、ELISA和免疫荧光检测表明基因稳定表达。
结论：本研究通过获得稳定表达VEGF165的脂肪组织来源干细胞为糖尿病性勃起障碍的治疗奠定了基础。
第三部分：经VEGF165基因修饰后的脂肪组织来源的干细胞治疗糖尿病性勃起功能障碍大鼠。
目的：探讨经VEGF165基因修饰后的ADSCs治疗DMED大鼠的有效性。
方法：将实验动物分为五组：A、正常对照组；B、空白(阴性)对照组；C、慢病毒-VEGF165治疗组；D、空白ADSCs治疗组；E、VEGF165-ADSCs治疗组。注射后在不同时间段7天和28天行大鼠阴茎海绵体内压和平均颈动脉压的测定，测压后取其阴茎组织做免疫组化及Western Blot分析。
结果：经过7天和28天治疗后，其ICP、ICP/MAP％、AUC上升明显，在阴茎海绵体内可找到GFP标记的细胞，并且免疫组化及Western Blot分析发现其VEGF系统功能得到一定程度的恢复，表现为VEGF,Flk-1,eNOS表达升高，以E组效果最明显。
结论：经过VEGF165-ADSCs治疗，DMED大鼠受损的勃起功能及VEGF系统功能异常可以得到一定程度的恢复。