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··荷叶(Folium nelumbinis)为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶,味苦性平,归肝、脾、胃经,具有清热解暑、升发清阳、凉血止血等功效,主治暑热烦渴、暑湿泄泻、脾虚泄泻、血热吐衄、便血崩漏。现代药理研究表明荷叶具有调节血脂、镇咳祛痰、降低血压、解痉等作用,临床用于治疗高脂血症、肥胖、肺炎、小儿夏季热等症,其中含有的生物碱类和黄酮类成分具有较强的生物活性。为进一步开发和有效利用荷叶黄酮部位及生物碱部位,对其化学成分,及其黄酮部位提取纯化工艺进行了研究。
本论文分为三个部分。第一部分文献研究对荷叶中的主要化学成分及药理作用研究进行了综述,共引用文献44篇。
第二部分荷叶化学成分研究采用多种分离纯化方法和结构鉴定手段(如Uv、EI-MS、ESI-MS、1HNMR、13CNMR等波谱学技术和化学方法),对荷叶化学成分进行了研究。从荷叶中分离鉴定得到了21个化合物,其中黄酮类化合物8个,生物碱类化合物7个,倍半萜类化合物1个,其他类化合物5个,分别为异鼠李素,胡萝卜苷,山柰酚,B-谷甾醇,槲皮素,(2R,4S,4aS,8aS)-4,4a-环氧-4,4a-二氢食用西番莲素,紫云英苷,柯伊利素-7-0-β-D-葡萄糖苷,异槲皮苷,金丝桃苷,邻二苯酚,槲皮素-3-0-β-D-砒喃木糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷,1.二十烷醇,荷叶碱,1.十一烷醇,鹅掌楸碱,2一羟基一卜甲氧基阿朴啡,原荷叶碱,去氢莲碱,去氢荷叶碱,莲碱。其中异鼠李素,(2R,4S,4aS,8aS)-4,4a-环氧-4,4a-二氢食用西番莲素,槲皮素-3-0-β-D比喃木糖(1→2)-β-D比喃葡萄糖苷,柯伊利素-7-0-β-D-葡萄糖苷,邻二苯酚,1-二十烷醇,1-十一烷醇等7个化合物为首次从荷叶中分离得到。
第三部分荷叶黄酮部位提取纯化工艺研究对荷叶黄酮部位提取工艺进行了研究。采用L9(34)正交试验,以总黄酮以及主要指标性成分异槲皮苷的提取量为考察指标,通过对提取溶剂、提取次数、提取时间、溶剂用量的考察,建立了荷叶黄酮部位最佳提取工艺。即A2%乙醇提取B2次,每次提取C2小时,溶剂用量为D2倍量。
采用大孔树脂纯化方法分离优化了荷叶黄酮部位。通过对5种不同大孔吸附树脂的筛选,确定B型大孔吸附树脂对总黄酮和异槲皮苷成分具有较好的吸附性能。通过考察上样液浓度、吸附流速、树脂柱径高比、最大上样量、除杂溶剂、除杂溶剂用量、洗脱溶剂、洗脱溶剂用量及树脂重复使用次数等树脂参数,对B型大孔吸附树脂纯化荷叶黄酮部位工艺进行优化,最终确定荷叶黄酮部位最佳树脂纯化工艺为:荷叶乙醇提取物上样液浓度C3mg/mL(以药材量计),吸附流速V1BV/h,树脂柱径高比为D2,上样量为L3mg/mL(以总黄酮量计),水洗脱X3BV进行除杂,除杂流速为E1BV/h,用Q3%乙醇洗脱3BV,洗脱流速为W1BV/h。树脂经95%乙醇和1mol/LNaOH再生后可重复使用8次。对荷叶黄酮部位提取工艺和纯化工艺进行了验证。3批样品的制备和含量测定结果表明,荷叶黄酮部位提取纯化工艺合理、稳定。提取物得率为26.5~28.5%,黄酮部位得率5~6%,总黄酎含量为65-75%,转移率芷85%以上。指际性成分异槲皮苷含量为21~25%,转移率在75%以上;金丝桃苷含量为5.9~6.5%,转移率在80%以上。结果稳定,基本符合要求。