【摘 要】
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重组腺伴随病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)因具有安全性好、能感染多种类型的细胞、可介导外源基因的长期表达等特点,是目前最理想的基因治疗载体之一.该报
【出 处】
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中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心
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重组腺伴随病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)因具有安全性好、能感染多种类型的细胞、可介导外源基因的长期表达等特点,是目前最理想的基因治疗载体之一.该报道一种新型、高效、适于扩大规模的rAAV载体生产系统.该系统由两部分组成:一部分为重组了2型腺伴随病毒(adeno-associated virus type2,AAV-2)rep和cap基因的1型 单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1),它既能作为rAAV的辅助病毒,又能反式提供rAAV复制和包装所必需的蛋白质;另一部分是稳定携带rAAV载体成分的细胞株(简 称载体细胞株).采用"一种辅助病毒感染一个载体细胞株"的策略,用"感染"的方式代 替传统的"转染"方式,可实现rAAV的大规模生产.实验中采用一套含有HSV-1全基因组的 黏粒系统(Conningham C,et al.1993)产生重组HSV-1.构建了携带新霉素抗性基因、适合 多种外源基因插入的通用型rAAV载体质粒pSNAV和pSNAV-2.该文首次报道了一种具有rAAV复制和包装的功能的辅助病毒.利用该系统所提供的辅助病毒HSV1-rc/△UL2和通用型rAAV载 体质粒pSNAV和pSNAV-2,采用"一种辅助病毒感染一个载体细胞株"的策略,可以将多种目的基因包装成rAAV,并能够实现rAAV的大规模生产,从而解决了rAAV用于临床基因治疗的"瓶颈"问题.采用该生产系统,成功地包装了携带多种外源基因的rAAV.用分别携带GFP基 因和人促红细胞生成素(human erythuopoietin,hEpo)基因的rAAV进行了体内外转导的研究.
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