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传统的微生物检测方法大部分使用琼脂作为培养基载体,然而琼脂不能在冷水凝固,在制备微生物培养基时,需要先加热、冷却到一定温度后,才能倒平板使用,大大影响了检测效率,不能满足社会和食品检测的发展需要。测试片法因其省却繁重准备工作;检样直接接种在测试片上,适宜温度培养后计数,操作简单方便,缩短检测时间,因而具有巨大的发展潜力。加上新的食品卫生微生物检验方法国家标准GB-4789/2008已颁布,新增测试片的检验方法,促使了测试片的更快发展。
其中,测试片的关键技术是制备微生物培养基重要组成部分的冷水可凝胶载体,其不需加热,遇水凝固的性质,大大提高检测用测试片的性能。
本研究研发出由黄原胶和瓜尔胶复配而成、凝胶性质优良的冷水可凝胶—HKG,对其进行理化和生物学性质,和胶体作为主要凝固剂在测试片中的应用效果研究后,评价了其作为培养基载体应用于测试片的可行性,凝胶的适用范围以及探讨了胶体性质与分子结构和添加物间的关系。另外,为了使冷凝胶的应用更为广泛,观察其应用于普通玻璃培养皿上的效果。
主要研究结果:
1.确定微生物测试片的材料和设计,上层和底板为透明的聚乙烯塑料薄膜,中层为透明的聚对苯二甲酸胶片。
2.黄原胶和瓜尔胶各复配比例的pH为6.82~7.22,接近中性;复配胶体随浓度增加,pH稳定为6.98~7.05:透光度下降,粘度上升。确定一种最优的比例为5:5,命名HKG。0.2%时其pH、透明度和粘度分别为pH6.98、透光度为75.16%~81.85%、粘度为448.75 mPa.s,2.5min达最大吸水率为82.4g/g,胶体具有一定保水性,强度与琼脂相当。
3.研究高低浓度HKG在不同温度、剪切力和盐糖浓度下的粘度变化,0.2%加热80℃后粘度最高,为1192mPa.s,80℃以上粘度下降,1.0%加热100℃后最高为3890mPa.s,100℃以上粘度下降;剪切力对0.2%粘度变化不明显,1.0%自6r/min~60r/min粘度降幅为86.8%,停止后恢复粘度;pH=7粘度最高,pH4~12粘度基本稳定;加入氯化钠、氯化钠一葡萄糖对高浓度胶体粘度分别为增加和维持稳定,但使低浓度胶体粘度下降;葡萄糖对胶体的粘度增加。
4.黄原胶和瓜尔胶之间透过分子间键力作用,粘度比单独胶体高。其凝胶性质可能与黄原胶的侧链负电荷基团有关,影响胶体分子间的结合程度。
5.HKG胶体在短时期内(5天)不被微生物利用分解;无毒,对15种测试菌株无抑制作用,未见出现抑菌圈。
6.在采用HKG作为主要凝固剂组装的测试片中,制备的菌落总数测试片、金黄色葡萄球菌测试片与倾注培养法菌落计数比较无差异。另制成冷水可凝的薄膜用于普通玻璃培养皿中,制备大肠菌群和沙门氏菌测试平板与倾注培养法菌落计数比较无差异。
结果表明HKG适用于作为测试片法的凝固剂,其稳定的理化和生物特性可与不同的培养基复配使用;另透过对凝胶性质与分子间结构关系的探讨,可为HKG的调整与优化以搭配不同的微生物培养提供了理论依据。