【摘 要】
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目的在胃癌SGC7901细胞中,研究过表达miR-34a对肿瘤增殖及对化疗药物敏感性的影响,为胃癌的诊疗提供理论和实验依据。方法在前期的实验基础上,选择miR-34a基因序列,制备双链D
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目的在胃癌SGC7901细胞中,研究过表达miR-34a对肿瘤增殖及对化疗药物敏感性的影响,为胃癌的诊疗提供理论和实验依据。方法在前期的实验基础上,选择miR-34a基因序列,制备双链DNA oligo,应用基因重组技术克隆到pcDNA6.2-EGFP载体中DNA中,然后行测序鉴定。用Asc1和Pme1进行双酶切构建pLenti6.3-EGFP-miR-34a慢病毒载体。将构建好的载体混合包装质粒共转染293T细胞包装病毒,72h后离心去除细胞碎片收集病毒原液。将miR34a过表达慢病毒感染SGC7901细胞8h,使用5-FU药物处理24h,CCK-8检测miR-34a对SGC7901细胞增殖以及药物敏感性,以及对5-FU的协同药物作用。结果(1)双酶切证实所设计的miR-34a插入慢病毒载体是正确的,DNA测序验证插入的序列是准确的;应用293T细胞成功包装pLenti6.3-EGFP-miR-34a的重组慢病毒载体。(2)miR34a过表达慢病毒及阴性对照慢病毒感染SGC7901细胞后,使用CCK-8检测SGC7901细胞增殖情况,第1天、第2天、第3天细胞活力OD值分别为0.237、0.227,0.343、0.344,0.508、0.548,显示miR34a过表达后引起SGC7901细胞增殖减慢,但差异无统计学意义(P=0.9368)。(3)使用5-FU药物处理后,检测SGC7901细胞增殖情况,miR34a过表达慢病毒和阴性对照病毒细胞活力OD值分别为0.19、0.36,显示miR34a过表达后显著抑制了SGC7901细胞增值(P=0.0197)。结论成功构建miR-34a过表达慢病毒载体,并成功感染SGC7901细胞。miR34a过表达后引起SGC7901细胞增殖无明显变化,但miR34a过表达后显著提高了SGC7901细胞对5-FU的药物敏感性。
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