复方脑得生制剂与其各单方对大鼠局灶性脑缺血损伤保护作用的研究

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目的:探讨复方脑得生制剂与其单方红花,葛根的水提总浸膏与有效部位总浸膏对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用;探讨羟基红花黄色素 A(hydroxysaffloryellow A,HSYA)对其促脑缺血后血管新生的作用机制。  方法:探讨复方脑得生制剂与其单方红花,葛根其水提总浸膏与有效部位总浸膏对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用,建立线栓法致大鼠大脑中动脉阻塞模型(Middle cerebral artery occlusion,MCAO),设缺血24h一个时间点,每个时间点分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)、治疗组(n=10)。缺血60分钟灌胃给药,24h后观察对脑缺血大鼠神经行为障碍和大鼠脑梗死体积的影响;探讨羟基红花黄色素A(hydroxysaffloryellow A,HSYA)对其促脑缺血后血管新生的作用机制,以MCAO大鼠为模型,设缺血后1.5h、3h、6h、12h、24h五个时间点,每个时间点分为假手术组、模型组和HSYA治疗组(n=3).采用Western Blotting法分别观察HSYA对线栓法致急性脑缺血后1.5h、3h、6h、12h、24h缺血侧皮层半暗带中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、Fam样酪氨酸激酶受体(Fam-like tyrosine kinase receptor,Flt)、成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF、Acid fibroblast growth factor,aFGF)蛋白表达的影响,以GAPDH为内参,结果采用图像分析软件进行半定量分析。  结果:与模型组比较,复方脑得生制剂能减轻脑缺血24h大鼠的神经行为状态(P<0.01),脑梗死面积(P<0.05);复方脑得生制剂水提总浸膏能减轻脑缺血24h大鼠的神经行为状态(P<0.05);复方脑得生制剂有效部位总浸膏能减轻脑缺血24h大鼠的神经行为状态(P<0.01),脑梗死面积(P<0.05);红花水提总浸膏能减轻脑缺血24h大鼠的神经行为状态(P<0.01)。红花有效部总浸膏位能减轻脑缺血24h大鼠的神经行为状态(P<0.01),脑梗死面积(P<0.05);葛根水提总浸膏能减轻脑缺血24h大鼠的神经行为状态(P<0.05)。葛根有效部位总浸膏能减轻脑缺血24h大鼠的神经行为状态(P<0.05),脑梗死面积(P<0.05);蛋白免疫印迹研究显示,MCAO后24h内,HSYA可先后使缺血侧脑皮层半暗带HIF-1α、Flt、aFGF、bFGF蛋白的表达显著上调,与模型组比较有显著差异(P<0.05),其上调作用具有不同的时相性。HSYA可上调 VEGF的蛋白表达,但与模型组比较未见显著差异。  结论:复方脑得生制剂与各单方对大鼠局灶性脑缺血模型损伤有治疗效果,可明显改善脑缺血大鼠的神经行为症状,缩小缺血区范围;通过分子生物学技术初步证实aFGF、bFGF、Flt、HIF-1α、VEGF等因子在蛋白水平的上调可能是HSYA促血管新生的主要分子基础。
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