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TGF-β1被证明在多种肿瘤细胞中诱导HMGA1的表达。然而，在滋养细胞中TGF-β1对HMGA1表达的影响和TGF-β1抑制滋养细胞侵袭过程中HMGA1的作用并不清楚。本课题拟分析TGF-β1对HTR-8/SVneo细胞中HMGA1表达的影响，并初步探讨TGF-β1抑制HTR-8/SVneo细胞侵袭过程中HMGA1的作用，为子痫前期的防治提供实验支持。 目的： 1.探讨HTR-8/SVneo细胞中TGF-β1对HMGA1表达的影响。 2.探讨HTR-8/SVneo细胞中TGF-β1对PI3K/Akt信号通路的影响。 3.探讨TGF-β1抑制HTR-8/SVneo细胞侵袭过程中HMGA1的作用。 方法： 1.研究对象 本研究选用购自北京鼎国昌盛生物技术有限公司的人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/SVneo细胞，用海克隆DMEM高糖培养基(10％FBS)进行培养，放置于湿度适宜的恒温细胞培养箱(37℃、5％CO2)中。用活力好的、处于对数期的HTR-8/SVneo细胞进行相关实验，每组实验重复三次。 2.方法 本研究利用DMEM高糖培养基(10％FBS、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素)，将HTR-8/SVneo细胞悬浮后置于恒温培养箱(37℃、5％CO2)中进行培养。选择对数期活力好的细胞进行实验，以1.0×106/ml的细胞密度接种于6孔或12孔细胞培养板，接种后，将细胞培养板继续在培养箱中孵育。 2.1不同作用时间点的TGF-β1对HTR-8/SVneo细胞中HMGA1表达的作用采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)实验和蛋白免疫印迹实验(Western blot)方法，在使用终浓度为5ng/mlTGF-β1作用HTR-8/SVneo细胞0h、6h、12h、24h、36h后，检测细胞中HMGA1的表达。 2.2阻断PI3K/Akt通路对TGF-β1诱导HTR-8/SVneo细胞中通路蛋白Akt、p-Akt表达的影响 采用Western blot实验检测HTR-8/SVneo细胞p-Akt、Akt的表达。HTR-8/SVneo细胞分为4组：空白对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1+Wortmannin处理组、Wortmannin处理组。 2.3阻断PI3K/Akt通路后TGF-βi对HTR-8/SVneo细胞中HMGA1表达的影响 采用Real-time PCR实验和Western blot实验检测各组HMGA1的表达。HTR-8/SVneo细胞分为4组：空白对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1+Wortmannin处理组、Wortmannin处理组。 2.4沉默HMGA1基因对HTR-8/SVneo细胞中HMGA1mRNA和蛋白表达的影响 采用Real-time PCR实验和Western blot实验检测各组HMGA1的表达。HTR-8/SVneo细胞分为5组：空白对照组、阴性对照+转染试剂组、HMGA1siRNA-1+转染试剂组、HMGA1siRNA-2+转染试剂组、HMGA1siRNA-3+转染试剂组。 3.统计学处理 应用SPSS21.0软件和Graphpad prism7统计学软件，对实验所得数据进行统计学分析，属于计量资料的所有数据用(x)±s表示，且都进行正态性检验。独立样本t检验用于两组间数据的比较。多组间数据比较，先检验方差齐后再采用单因素方差分析，两两组间比较采用LSD-t检验。以α=0.05作为检验水准。 结果： 1.不同时间点的TGF-β1对HTR-8/SVneo细胞中HMGA1蛋白、mRNA表达水平的影响 Western blot结果显示，TGF-β1处理后6h、12h、24h、36h的HMGA1蛋白表达量与0h组相比均升高，具体结果为：0h组(0.61±0.036)、6h组(0.99±0.08)、12h组（1.15±0.04）、24h组（1.36±0.03）、36h组(1.23±0.07)，差异具有统计学意义(p＜0.05)。 Real-time PCR结果显示，TGF-β1处理后6h、12h、24h、36h的HMGA1mRNA表达量与0h组相比均升高，具体结果为：0h组(1.01±0.22)、6h组（2.47±0.39）、12h组（2.74±0.17）、24h组（3.11±0.08）、36h组(2.83±0.14)，差异具有统计学意义(p＜0.05)。 TGF-β1处理24h组与其它各时间点相比，HMGA1的蛋白表达量和mRNA表达量最高，故选取TGF-β1处理24h进行后续实验。 2.阻断PI3K/Akt通路对TGF-β1诱导HTR-8/SVneo细胞中通路蛋白p-Akt、Akt表达的影响 Western blot结果显示，各组p-Akt的蛋白表达量为：空白对照组（0.88±0.09）、TGF-β1处理组(1.26±0.07)、TGF-β1+Wortnammin处理组（1.09±0.11），Wortmannin处理组（0.42±0.08）。TGF-β1处理组与空白对照组相比，p-Akt蛋白表达水平明显上调，差异具有统计学意义（P＜0.05）。TGF-β1+Wortnammin组与TGF-β1处理组相比，明显抑制了p-Akt的蛋白表达水平，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 Western blot结果显示，各组Akt的蛋白表达量为空白对照组（1.29±0.11）、TGF-β1处理组（1.48±0.08）、TGF-β1+Wortmannin处理组（0.86±0.11）、Wortmannin处理组（0.22±0.05）。TGF-β1处理组与空白对照组相比，Akt蛋白表达水平明显上调，差异具有统计学意义（P＜0.05）。TGF-β1+Wortmannin处理组与TGF-β1组相比，Akt的蛋白表达水平明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 3.阻断PI3K/Akt通路对TGF-β1诱导HTR-8/SVneo细胞中HMGA1蛋白表达的影响 Western blot结果显示，各组HMGA1蛋白表达量为空白对照组（1.09±0.19）、TGF-β1处理组（1.51±0.27）、TGF-β1+Wortmannin处理组（1.34±0.12）、Wortmannin处理组（0.51±0.07）。TGF-β1处理组与空白对照组相比，明显上调了HTR-8/SVneo细胞中HMGA1的蛋白表达水平，差异具有统计学意义（P＜0.05）。TGF-β1+Wortmannin处理组与TGF-β1处理组相比较，HMGA1的蛋白表达水平降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 4.沉默HMGA1基因对HTR-8/SVneo细胞中HMGA1蛋白和mRNA表达的影响 Real-time PCR结果显示，各组HMGA1mRNA的表达量为空白对照组（1.01±0.08）、阴性对照+转染试剂组(0.99±0.07)、HMGA1siRNA-1+转染试剂组（0.32±0.13）、HMGA1siRNA-2+转染试剂组（0.60±0.04）、HMGA1siRNA-3+转染试剂组（0.51±0.22）。HMGA1siRNA-1+转染试剂组、HMGA1siRNA-2+转染试剂组、HMGA1siRNA-3+转染试剂组与空白对照组相比较，HMGA1mRNA的表达水平明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 Western blot结果显示，各组HMGA1蛋白的表达量为空白对照组（1.12±0.33）、阴性对照+转染试剂组（0.99±0.27）、HMGA1siRNA-1+转染试剂组（0.21±0.11）、HMGA1siRNA-2+转染试剂组（0.25±0.06）、HMGA1siRNA-3+转染试剂组（0.34±0.15）。HMGA1siRNA-1+转染试剂组、HMGA1siRNA-2+转染试剂组、HMGA1siRNA-3+转染试剂组与空白对照组相比较，HMGA1的蛋白表达量明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 5.TGF-β1通过调节HMGA1表达抑制HTR-8/SVneo细胞侵袭 Transwell侵袭实验结果表明，各组侵袭细胞数为空白对照组（106.3±3.62）、TGF-β1处理组（45.2±3.38）、TGF-β1+siHMGA1组（75.1±2.91）、siHMGA1组（64.6±4.15）。TGF-β1处理组的侵袭细胞数与空白对照组相比明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。TGF-β1+siHMGA1组的侵袭细胞数与TGF-β1处理组相比明显增多，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论： 本研究表明，TGF-β1通过激活PI3K/Akt信号通路调节HTR-8/SVneo细胞中HMGA1的表达，TGF-β1通过调节HMGA1抑制HTR-8/SVneo细胞侵袭。