【摘 要】
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带3蛋白,又称阴离子交换蛋白1(Anion Exchangerl,AE1),是红细胞膜上一种重要的跨膜糖蛋白质,介导Cl的跨膜交换过程,该研究在课题组已有工作基础上,采用免疫共沉淀的方法,重点
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带3蛋白,又称阴离子交换蛋白1(Anion Exchangerl,AE1),是红细胞膜上一种重要的跨膜糖蛋白质,介导Cl<'->/HCO<,3><'->的跨膜交换过程,该研究在课题组已有工作基础上,采用免疫共沉淀的方法,重点研究了带3蛋白与肿瘤相关蛋白P16的相互作用,主要研究内容和结果如下:1.该实验利用PCR的方法成功地将P1 6cDNA片段扩增后连接到GSTgenefusionsystem的表达载体pGEX-6P-1上,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后收集培养物并裂解大肠杆菌细胞,所得菌液用GST gene fusion system的纯化试剂盒纯化后得到单纯的GST-p16融合蛋白.2.利用网织红翻译系统在体外成功地表达了AEl蛋白.3.将所表达的两种蛋白质在体外孵育,加AEl相应抗体后用Protein A的珠子沉淀抗原抗体复合物,将所得产物用洗涤缓冲液洗涤数次后,进行SDS-PAGE分析,聚丙烯酰胺凝胶中有p16对应位置的条带.这一结果表明AEl和p16在体外存在相互作用,进一步验证了前期的实验结果.该实验为进一步研究带3蛋白在疾病、肿瘤发生和凋亡过程中的作用提供了线索.
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