橙色大白菜离体再生体系的建立及原生质体分离

• 作 者: 屈会玲
• 机 构: 西北农林科技大学
• 出 处: 西北农林科技大学 西北农林科技大学
• 发表日期: 2007年期
• 关键词: 橙色大白菜 子叶 下胚轴 不定芽再生 原生质体分离

以橙色大白莱（Brassica campestris syn. rapa L. ssp.pekinensis （Lour） Olsson）优良品系01S303-1等为试材,通过研究激素种类及其配比、硝酸银、脱落酸以及苗龄、基因型对不定芽再生率的影响,不同生长素对不定根再生的影响,建立了子叶再生体系。研究了植株苗龄、酶液浓度、酶解时间以及甘露醇浓度等对大白菜子叶原生质体产量的影响。取得如下结果:1.橙色大白菜01S303-1的子叶和下胚轴在只附加6-BA和NAA或TDZ和NAA的MS培养基中,不定芽的再生率都很低。2.AgNO₃能大幅度的提高橙色大白菜01S303-1子叶和下胚轴不定芽的再生率。在MS+7 mg/L 6-BA+2 mg/L NAA培养基中,添加2 mg/L AgNO₃时,子叶不定芽再生率由不加AgNO₃的2.5%提高到57.5%;添加6 mg/L AgNO₃时,下胚轴不定芽再生率由不加AgNO₃的0%提高到27.5%。在MS+0.1 mg/L TDZ+1.5 mg/L NAA培养基中,添加10 mg/L AgNO₃时,子叶不定芽再生率由不加AgNO₃的0%提高到82.5%。在MS+0.05 mg/L TDZ+4 mg/L NAA培养基中,添加10 mg/L AgNO₃时,下胚轴不定芽的再生率由不加AgNO₃的0%提高到25%。3.在不同培养基中,ABA对橙色大白菜01S303-1子叶不定芽再生率的影响不同。在MS+7 mg/L 6-BA+2 mg/L NAA+2 mg/L AgNO₃的培养基中,适当浓度的ABA对子叶不定芽的再生起促进作用。当ABA浓度为0.3 mg/L时,子叶不定芽的再生率最高,达85%。但在MS+0.1 mg/L TDZ+1.5 mg/L NAA+10 mg/L AgNO₃的培养基中,ABA对子叶不定芽再生率起抑制作用。4.橙色大白菜不定芽再生率还受到外植体类型、苗龄、基因型等因素的影响。不同外植体的再生能力相差很大,大白菜子叶比下胚轴的再生能力强;6天苗龄比其它苗龄子叶的不定芽再生率较高。本研究使用的01S303-1、04S26、04S1361和04S1363四个橙色大白菜品系的子叶再生能力有一定的差异,其中01S303-1的再生率最高,04S1361和04S1363次之,04S26最低。5.IAA和NAA对橙色大白菜01S303-1不定根的诱导都有促进作用。不定根的诱导率随着IAA和NAA浓度增大而提高,当NAA为0.3 mg/L时,不定根的再生率达93.9%。6.橙色大白菜子叶原生质体的产量受到苗龄、酶液浓度、酶解时间和渗透压等的影响。以6天苗龄的子叶为材料,在含有0.6%纤维素酶和0.1%果胶酶的酶液中（酶液由含有10%甘露醇的CPW液配制）酶解1 h时原生质体产量最高,每克鲜重的产量达1.5×106个。