温针治疗大鼠膝骨关节炎及其对TP53和Map2k3基因影响的实验研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xy_lfr
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目的:  观察温针在治疗膝骨关节炎大鼠的过程中对大鼠行为学的影响和对滑膜组织形态学改变的影响;通过检测膝骨关节炎大鼠滑膜组织中的TP53和Map2k3基因的表达情况,探讨温针对膝骨关节炎大鼠P38MAPK信号通路的影响,从基因表达角度阐释温针治疗膝骨关节炎的可能机制。  方法:  将健康的SD大鼠40只(性别:雄性,年龄:3月龄)按随机数字表法分为4组:正常组、模型组、药物组和温针组,10只/组。正常组未给予特殊处理,模型组、药物组和温针组的大鼠造模处理,方法为关节腔注射Papain联合强迫运动。造模成功后,温针组大鼠选用双侧“膝前穴”,共治疗20天,10天为1疗程,1天1次;药物组中的大鼠给予美洛昔康溶液治疗,1天1次,每次3.75mg/kg,连续灌胃20天。分别在治疗前,一个疗程后(10天)和两个疗程后(20天)评估各组大鼠的膝关节程度指数(Lequesne MG);在三个时间节点每组大鼠各取1只处死后剥取滑膜组织,利用HE染色的方法观察大鼠滑膜组织形态学的改变;治疗两个疗程结束后通过腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后处死大鼠,取双侧膝关节软骨和软骨下骨附着处的滑膜组织,采用实时定量PCR方法检测大鼠滑膜组织中TP53和Map2k3基因的表达情况。  结果:  第一部分:  1)治疗前,正常组与其他三组相比,大鼠膝关节程度指数评估的差异均有统计学意义(P<0.05),模型组、药物组及温针组组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05),组间具有可比性,提示造模成功。  2)治疗一个疗程后,药物组和温针组大鼠在局部和步态反应、关节活动和肿胀方面Ⅲ和Ⅳ级大鼠的数量明显减少,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。  3)治疗两个疗程后,药物组和温针组大鼠在局部和步态反应、关节活动和肿胀上评估为Ⅲ和Ⅳ级的大鼠数量均大幅减少,Ⅰ级和Ⅱ级的大鼠数量均明显增多,与模型组相比差异有显著统计学意义(P<0.01);与药物组相比,温针组的改善程度更为明显;随着疗程的增加,温针的叠加效应显现,不同疗程间比较差异有统计学意义(P<0.05)。  第二部分:  HE染色观察:治疗前,正常组的大鼠滑膜组织可见大量的脂肪细胞和滑膜细胞,造模组的大鼠滑膜组织均可见明显的炎性细胞浸润增多;治疗一个疗程后,温针组和药物组的大鼠滑膜组织炎性细胞明显减少,出现部分纤维组织和血管的增生,正常组的大鼠滑膜组织形态学基本同前,模型组还可见大量的炎性细胞;治疗两个疗程后正常组的大鼠滑膜组织形态学基本同前,模型组仍可见大量的炎性细胞,药物组可见少量炎性细胞、部分脂肪细胞和增生的血管,温针组可见少数炎性细胞散在分布,脂肪细胞增多。  第三部分:  1) KOA大鼠滑膜组织中TP53基因表达结果显示模型组、药物组和温针组三组TP53基因表达水平较正常组有显著升高,与正常组比较差异有显著的统计学意义(P<0.01);温针组与模型组相比,TP53基因表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);温针组与药物组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。  2)各组KOA大鼠滑膜组织中Map2k3基因表达差异无统计学意义(P>0.05)。  结论:  1)温针在一定程度上可以减轻KOA大鼠膝关节的局部反应,消除关节肿胀,提高关节的活动度,随着疗程的增加,中远期疗效叠加效应显现。  2)温针在一定程度上减少滑膜组织炎性细胞数量,减轻炎性症状,减少纤维组织的增生,促进受损的滑膜组织的修复。  3) TP53基因可能是膝骨关节炎大鼠的其中一个致病基因,温针可以降低膝骨关节炎大鼠滑膜组织TP53基因的表达水平,进而调控P38MAPK信号通路起到防治骨关节炎的作用。
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