【摘 要】
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兴奋性氨基酸转运蛋白是位于神经元和神经胶质细胞上的一类重要的膜蛋白,它们的 生物活性依赖于钠离子和钾离子,构成了神经递质转运蛋白超家族中一个独立的家族.谷氨酸转运蛋
【机 构】
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中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所
【出 处】
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中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学
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兴奋性氨基酸转运蛋白是位于神经元和神经胶质细胞上的一类重要的膜蛋白,它们的 生物活性依赖于钠离子和钾离子,构成了神经递质转运蛋白超家族中一个独立的家族.谷氨酸转运蛋白mEAAC1与中性氨基酸转运蛋白mASCT1同属兴奋性氨基酸转运蛋白家族,其氨基酸序列的同源性为40.5i,相似性达到70i之多,但其底物特异性却有着很大的差别;而它们又都是钠离子依赖性的,转运过程都产生内向电流,因此研究者认为二者可能具有相同的转运机制,只是因为某些氨基酸序列的差异,导致底物特异性的差别.为了寻找与底物特异性和结合相关的区域,研究者以mEAAC1和mASCT1为母本,用重组PCR的方法构建了嵌合分子,并 将野生型和嵌合分子在体外转录成cRNA,显微注射入非洲爪蟾卵母细胞进行表达,用同位素流量测定和双能电压钳的方法观察了野生型和嵌合分子的转运活力及电生理学特性.为了检测野生型及嵌合分子在卵母细胞中表达及整合至细胞膜上的情况,研究者选取转运蛋白特异性较强的COOH-端作为抗原:mEAAC1:462ˉ524aa,mASCT1:475ˉ532aa,mGLT1:493ˉ573aa,mGLAST1:495ˉ543aa构建了GST-融合蛋白表达载体,亲和层析得抗原蛋白,并经免疫 获得了抗体,经Westermblot检验表明都具有较强的效价和专一性.
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