胃癌中差异表达的miRNAs的筛选和鉴定

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong416
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背景:MiRNAs(microRNAs,微小RNA)近年来发现的一类长约21-25个核苷酸的内源性非编码单链小RNA分子,广泛存在于生物中,由各种多细胞生物的基因组所编码。最新版本miRBase数据库(Sanger microRNA序列数据库)显示现已发现的人源性成熟miRNAs序列有2154条,并且有越来越多的研究证实miRNAs与肿瘤的发生、发展、治疗及转归都密切相关。miRNAs与靶基因mRNA的3’非编码区(3’-untranslated region,3’UTR)结合,导致靶基因mRNA降解或翻译抑制,在转录后下调靶基因的表达,从而发挥其调节细胞分化、增殖、凋亡的作用。现生物信息学预测,一种miRNAs同时可靶向作用于约500个基因,miRNAs一共可调控约30%的人类基因组。并且,现已证实miRNAs表达失调可以抑制抑癌基因或激活原癌基因来启动肿瘤的生成。中国是胃癌高发区,而目前胃癌中表达异常的miRNAs尚未完全阐明。  目的:本实验以胃癌为研究对象,筛选及验证胃癌中表达异常的miRNAs,并初步分析其与临床病理因素的相关性,为进一步研究胃癌发生、发展及转移提供理论依据。  方法:1、收集2011年08月至2012年02月在哈尔滨医科大学附属第三临床医院行胃癌手术患者的术后胃癌组织标本及相应癌旁正常胃组织标本各33例:2、提取所有标本总RNA,应用miRNA表达谱芯片筛选相对于癌旁正常胃组织,胃癌组织中表达异常的miRNAs;3、选取芯片结果中在胃癌组织中高表达的miR-105作为目标miRNAs,进一步应用实时荧光定量PCR方法检测目标miRNAs在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达情况;4.分析目标miRNAs在胃癌中的表达与肿瘤直径、分化程度、有无淋巴结转移、TNM分期、WHO组织分型、Borrman分型的相关性。  结果:1、miRNAs表达谱芯片结果显示胃癌组织中上调的miRNAs有miR-105、miR-548n、miR-214*等31个,下调的miRNAs有miR-31、miR-1275、miR-26b*等20个:2、实时荧光定量PCR检测结果提示:相对于癌旁正常胃组织,miR-105在胃癌中高表达,改变有统计学意义(P<0.05);3、统计分析结果显示:miR-105表达水平可能与胃癌淋巴结转移相关(P<0.05);4.miR-105表达水平与肿瘤直径、肿瘤分化程度、Borrmann分型、WHO组织分型和TNM分期无明显相关性(P>0.05)。  结论:1、miRNAs表达谱芯片结果中高表达的miR-105,应用实时荧光定量PCR在33例胃癌组织中得到证实,提示miR-105可能与胃癌的发生相关:2、胃癌中miR-105的高表达与有无淋巴结转移相关,提示miR-105还可能同时与胃癌的发展及转移有关。
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