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目的：柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3，CVB3)属小RNA病毒科肠道病毒属，是病毒性心肌炎的主要病原。微小RNA(miRNAs)可与靶mRNA3’端非编码区识别结合而抑制其翻译。本实验的目的即为筛选影响CVB3复制的宿主microRNAs。
方法：①微阵列芯片分析Balb/c乳鼠原代心肌细胞在感染CVB3前后miRNAs表达差异情况，筛选出感染后表达量变化显著的miRNAs。分别应用双荧光素酶报告基因检测方法及RT-qPCR在HeLa-Luc细胞及HeLa细胞中筛选可抑制RLuc-CVB3、CVB3复制的miRNAs。②应用荧光计数方法鉴定可促进RLuc-CVB3复制的miRNAs。
结果：①微阵列芯片结果显示，Balb/c乳鼠原代心肌细胞在感染CVB3前后miR-342-5p的表达有显著变化。将人工合成的miR-342-5p、miR-mock分别转染HeLa-Luc细胞，用MOI=1的RLuc-CVB3感染此细胞，不同时间点检测RLuc/FLuc的活性。结果显示转染miR-342-5p组的荧光素酶活性明显低于miR-mock组(P<0.05)。CVB3感染miR-342-5p转染的HeLa细胞，24h后收获细胞，提取细胞总RNA，RT-qPCR检测CVB3的RNA表达情况，结果显示转染miR-342-5p组CVB3的RNA量明显下降(P<0.05)。②人工合成的miR-10a(ss)、miR-10a*、miR-mock转染HeLa细胞，再感染RLuc-CVB3，感染后28h、32h、36h转染miR-10a*组的荧光素酶活性明显高于mock组(P<0.05)，转染miR-10a(ss)组的荧光素酶活性与miR-mock组相比则无明显变化(P>0.05)。
结论：①从CVB3感染的Balb/c乳鼠原代心肌细胞与正常原代细胞的miRNA表达芯片，筛选出miR-342-5p和miR-10a*对CVB3复制有调控作用。②miR-342-5p可抑制CVB3在HeLa细胞内的复制，miR-10a*可促进CVB3在HeLa细胞内的复制。