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目的:研究质粒介导的喹喏酮类耐药基因(PMQR)在哈尔滨市肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌临床菌株中的分布状况,及其与喹诺酮类药物和氨基糖苷类耐药性的关系。
方法:从哈市4所教学医院收集非重复的肺炎克雷伯菌238株,大肠埃希菌69株,K-B纸片扩散法测定细菌对环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素和阿米卡星的药物敏感性;PCR方法检测菌株qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6)-Ib五种质粒介导喹诺酮耐药相关基因;限制性内切酶BtsCI酶切消化aac(6)-Ib PCR阳性产物以确定aac(6)-Ib-cr,并通过测序验证其序列:分析质粒介导的喹诺酮耐药基因与细菌氟喹诺酮类耐药性和氨基糖苷类耐药性的关系。
结果:238株肺炎克雷伯菌中,对环丙沙星和左氧氟沙星耐药的菌株分别有77株和52株,耐药率为32.4%和21.8%。69株大肠埃希菌中,对环丙沙星和左氧氟沙星耐药的分别为55株和37株,耐药率为79.7%和53.6%。肺炎克雷伯菌中,携带PMQR的菌株共130株,占54.6%;其中qnrA、qnrB、qnrS分别检出1株、13株和8株,占0.8%、10%和6.2%;69株检测到aac(6)-Ib基因,其中26株经BtsCI酶切鉴定为aac(6)-Ib-cr基因,占肺炎克雷伯菌总菌株的10.9%;未检测到qepA基因。大肠埃希菌中,携带PMQR的菌株共44株,占63.8%;其中qnrA、qnrB、qnrS分别检出5株、3株和1株,占11.4%、6.8%和2.3%;32株检测到aac(6)-Ib基因,其中12株经BtsCI酶切鉴定为aac(6)-Ib-cr基因,占大肠埃希菌总菌株的17.4%;2株检测到qepA基因,占2.9%。肺炎克雷伯菌中,PMQR阳性菌株对环丙沙星的耐药率是40.8%,PMQR阴性菌株其耐药率是22.2%,差异有统计学意义(P<0.05);PMQR阳性菌株对左氧氟沙星的耐药率是27.7%,PMQR阴性菌株对其耐药率为14.8%,差异有统计学意义(P<0.05)。大肠埃希菌中,PMQR阳性菌株对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别是84.1%和59.1%,PMQR阴性菌株对两种药物的耐药率分别是72.0%,44.0%。差异均无统计学意义(P>0.05)。携带PMQR的肺炎克雷伯菌对庆大霉素的耐药率为42.3%,而PMQR阴性的肺炎克雷伯菌对庆大霉素的耐药率为26.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:本地区肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌临床分离株中,质粒介导喹诺酮类耐药基因分布较广泛;肺炎克雷伯菌中,质粒介导喹诺酮耐药基因与环丙沙星和左氧氟沙星耐药相关,大肠埃希菌中,未发现此相关性。肺炎克雷伯菌中,质粒介导喹诺酮耐药基因的携带还与庆大霉素耐药相关。