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目的:通过动物实验和临床试验,观察健脾方对血糖、血清胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、胰高血糖素(Glucagon)和胰岛β细胞功能的影响,探讨健脾方降低血糖、改善胰岛β细胞功能和提高血清GLP-1浓度之间的关系,初步求证中医治则“从脾论治糖尿病”的作用机制与肠促胰岛素GLP-1有关。
方法:采用高脂高糖饲料诱导幼年Wistar大鼠加小剂量链脲佐菌素(STZ,30mg/kg)的方法,建立2型糖尿病动物模型。动物实验分为4组(每组10只),1、2、3组为糖尿病模型大鼠,分别给予中药煎剂+高脂高糖饲料、生理盐水+高脂高糖饲料和中药煎剂+普通饲料。第4组为正常大鼠,给予生理盐水+普通饲料。造模时间3个月,分组干预时间1个月。实验结束后行糖耐量试验,检测各时相血糖;分别取空腹和灌服葡萄糖水后15大鼠静脉血2ml,应用放免试剂盒检测血清GLP-1和Glucagon的浓度变化:分别在各组大鼠中选择6只,处死取胰腺,应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰岛素mRNA的表达强度。临床试验采用小样本自身前后对照的方法,招募30名2型糖尿病符合“脾虚湿热”证型的患者,给予健脾方浓煎剂,每日两次,每次一袋口服。观察周期为8周。观察前后分别行OGTT试验,检测各时相血糖值和血清HbA1c值:分别取0和30时相静脉血,应用放免试剂盒检测血清GLP-1和Glucagon的浓度;利用胰岛素早期分泌指数(△Ins/△G)评价胰岛细胞早期分泌功能的改变。
结果:造模结束后,造模组大鼠空腹血清胰岛素水平高于对照组,随机血糖大于16.7mmol/L,证明造模成功。糖耐量试验结果:中药灌胃的两组糖尿病模型大鼠0、30、60血糖值低于未予中药的糖尿病模型大鼠(P<0.05);中药煎剂+普通饲料组的大鼠0血糖值和正常大鼠接近(P>0.05):中药灌胃的两组糖尿病模型大鼠120、180血糖值和未予中药的糖尿病模型大鼠无差异(P>0.05)。未予中药的糖尿病模型大鼠空腹血清GLP-1浓度低于正常大鼠(P<0.05)。中药灌胃的糖尿病模型大鼠空腹血清GLP-1浓度高于未予中药的糖尿病模型大鼠(P<0.05),中药煎剂+高脂高糖饲料组大鼠空腹血清GLP-1浓度也高于未予中药的糖尿病模型大鼠(P<0.05)。中药灌胃组大鼠、中药煎剂+高脂高糖组大鼠空腹Glucagon浓度分别低于未予中药的糖尿病模型大鼠(P<0.05)。各组大鼠灌服葡萄糖水后15血清GLP-1和Glucagon浓度没有差异(P>0.05)。胰岛素mRNA表达强度检测结果依次为正常大鼠>中药煎剂+普通饲料组>中药煎剂+高脂高糖饲料组>生理盐水+高脂高糖饲料组(P<0.05)。在临床试验中,治疗前后OGTT各时相血糖没有变化(P>0.05),血清HbA1c值下降(P<0.05);空腹血清GLP-1浓度上升,空腹及口服75g葡萄糖粉后30Glucagon浓度下降(P<0.05),但是30GLP-1浓度没有变化(P>0.05);治疗前后胰岛素早期分泌指数没有变化(P>0.05)。
结论:健脾方能够提高空腹血清GLP-1的浓度,促进胰岛素释放,抑制Glucagon表达,降低空腹血糖,调节糖代谢。健脾方通过提高血清GLP-1浓度,改善胰岛β细胞功能,提示糖尿病中医治则——“从脾论治”的作用机制与肠促胰岛素GLP-1密切相关。