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目的:观察不同时序艾灸肾俞穴延缓衰老的效应和对自然衰老大鼠肝脏P16、P21、表达的影响，基于不同生物年龄阐释艾灸延缓衰老的效应及其作用机制，为艾灸延缓衰老的临床运用提供科学依据。 方法:将40只SD大鼠随机分为4组，分别为自然衰老组（24月龄）、时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组，每组10只;同时设立12月龄对照组、18月龄对照组，每组10只。12月龄对照组、18月龄对照组，分别常规饲养至相应月龄，自然衰老组常规饲养到24月龄，时序1艾灸组，从大鼠12月龄开始艾灸肾俞穴，每天一次，每次20min，直至18月龄，18月龄后，常规饲养至24月龄;时序2艾灸组，从大鼠18月龄开始艾灸肾俞穴，每天一次，每次20min，直至24月龄;持续艾灸组，从大鼠12月龄开始艾灸肾俞穴，每天一次，每次20min，直至24月龄;各组大鼠至相应月龄后，观察大鼠皮毛、精神、活动状况、体重等一般情况，采用ELISA方法检测肝功能AST、ALT;采用生物化学方法检测血清中MDA含量，采用免疫组织化学法检测大鼠肝组织中SOD、P21、P16等蛋白的表达;采用qRT-PCR方法检测P16基因mRNA的表达水平。 结果: 1、在实验过程中，自然衰老组大鼠死亡2只、时序1艾灸组大鼠死亡2只，时序2艾灸组大鼠死亡2只，持续艾灸组大鼠死亡1只，故最终纳入实验的为12月龄对照组(n=10)、18月龄对照组(n=10)、自然衰老组(n=8)、时序1艾灸组(n=8)、时序2艾灸组(n=8)、持续艾灸组(n=9)。 2、在实验过程中，对照组大鼠随着月龄的增长，皮色渐进性枯黄，精神不振，活动迟钝。时序艾灸组及持续艾灸组大鼠皮毛光泽、精神状态、日常活动均有不同程度改善。治疗结束时各组大鼠体重虽有差异，但无统计学意义(P＞0.05)。 3、各组大鼠血清MDA的表达:与12月龄对照组比较，18月龄对照组，自然衰老组血清MDA含量明显升高，P值分别为:0.001、0.000，差异具有统计学意义(P＜0.01)。与18月龄对照组比较，自然衰老组大鼠血清MDA含量明显升高，P=0.000，差异具有统计学意义(P＜0.01)。与自然衰老组比较，时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组的血清MDA水平均有明显升高，P值分别为0.000，、0.000、0.000，有统计学意义(P＜0.01)。时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组三组比较，持续艾灸组血清MDA表达最低，与时序1艾灸组之间具有统计学差异，P=0.047(P＜0.05)。 4、各自大鼠肝组织中SOD的表达:与12月龄对照组比较，18月龄对照组、自然衰老组大鼠肝组织SOD表达明显下降，P值分别为0.018、0.000，差异具有统计学意义(P＜0.05);与18月龄对照组比较，自然衰老组大鼠肝组织SOD表达明显下降，P=0.000，差异具有统计学意义(P＜0.01)。与自然衰老组比较，时序1艾灸组、持续艾灸组的肝组织SOD表达均有明显升高，P值均为0.000，有统计学意义(P＜0.01)。时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组三组比较，时序2艾灸组肝组织SOD表达最低，与时序1艾灸组、持续艾灸组之间具有统计学差异，P值均为0.000(P＜0.01)。与时序1艾灸组比较，持续艾灸组肝组织SOD表达无统计学差异(P＞0.05)。 5、各组大鼠肝组织中P21蛋白表达:与12月龄对照组比较，18月龄对照组、自然衰老组大鼠肝组织P21表达明显升高，P值分别为0.043、0.000，差异具有统计学意义(P＜0.05);与18月龄对照组比较，自然衰老组大鼠肝组织P21表达明显升高，P=0.000，差异具有统计学意义(P＜0.01)。与自然衰老组比较，时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组的肝组织P21表达均有明显降低，P值均为0.000，有统计学意义(P＜0.01)。时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组三组比较，持续艾灸组肝组织P21表达最高，与时序1艾灸组、时序2艾灸之间具有统计学差异，P值分别为0.019、0.042(P＜0.05);时序1艾灸组、时序2艾灸之间不具有统计学差异（P＞0.05）。 6、各自大鼠肝组织中P16蛋白表达:与12月龄对照组比较，18月龄对照组、自然衰老组大鼠肝组织P16表达明显升高，P值均为0.000，差异具有统计学意义(P＜0.01);与18月龄对照组比较，自然衰老组大鼠肝组织P16表达明显升高，P=0.000，差异具有统计学意义(P＜0.01)。与自然衰老组比较，时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组的肝组织P16表达均有明显降低，P值分别为0.000、0.002、0.000，有统计学意义(P＜0.01)。时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组三组比较，时序2艾灸组肝组织P16表达最高，与时序1艾灸组、持续艾灸组之间具有统计学差异，P值分别为0.023、0.000(P＜0.05);时序1艾灸组、持续艾灸组之间不具有统计学差异(P＞0.05)。 7、各自大鼠肝组织中p16基因mRNA基因表达:与12月龄对照组比较，18月龄对照组、自然衰老组大鼠肝组织p16基因mRNA表达明显升高，P值分别为0.022、0.000，差异具有统计学意义(P＜0.05);与18月龄对照组比较，自然衰老组大鼠肝组织p16基因mRNA表达明显升高，P=0.000，差异具有统计学意义(P＜0.01)。与自然衰老组比较，时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组的肝组织p16基因mRNA表达均有明显降低，P值分别为0.000、0.001、0.000，有统计学意义(P＜0.01)。时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组三组之间比较，不具有统计学差异(P＞0.05)。 8、各组大鼠血清AST的表达:与12月龄对照组比较，18月龄对照组大鼠血清AST表达无统计学差异，P=0.656(P＞0.05);自然衰老组大鼠血清AST表达明显升高，P=0.027，差异具有统计学意义(P＜0.05);与18月龄对照组比较，自然衰老组大鼠血清AST表达无统计学差异，P=0.068(P＞0.05)。与自然衰老组比较，时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组均无统计学意义，P值分别为0.562、0.722、0.792(P＞0.05)。 9、各组大鼠血清ALT的表达:与12月龄对照组比较，自然衰老组、时序1艾灸组血清ALT表达明显升高，P值分别为:0.001、0.001，差异具有统计学意义(P＜0.05)。与18月龄对照组比较，自然衰老组、时序1艾灸组大鼠血清ALT表达明显升高，P值均为0.003，差异具有统计学意义(P＜0.05)。与自然衰老组比较，持续艾灸组大鼠血清ALT改变有统计学意义，P=0.045（P＜0.05），时序1艾灸组与时序2艾灸组大鼠血清ALT改变无统计学意义（P＞0.05）;时序1艾灸组、时序2艾灸组、持续艾灸组三组比较，持续艾灸组大鼠血清中ALT表达最低，与时序1艾灸组比较有统计学差异，P=0.045(P＜0.05)。 结论: 1.艾灸肾俞穴对衰老大鼠的一般状态有所改善; 2.艾灸能较好抵抗机体衰老自由基氧化损伤，增强机体抗氧化能力; 3.艾灸肾俞穴能抑制肝组织衰老相关基因p16、p21的表达，从而调控细胞周期，延缓衰老; 4.艾灸干预介入时间不同，抗衰老效应不同，从中年开始干预，抗衰老效果较好; 5.艾灸灸程不同，抗衰老效应不同，从中年开始持续干预，抗衰老效果较好; 6.艾灸对肝功能无损伤作用。