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目的:以人高转移性肺癌细胞(PG)为研究对象,从细胞、分子、基因层次,采用给药血清的方法观察不同治则中药复方抑制肺癌PG细胞侵袭转移,初步探讨其机制。
方法:采用给药血清的方法把不同治则中药复方分为扶正组、祛邪组、扶正祛邪组、对照组、空白组五组;采用在倒置显微镜下观察肺癌PG细胞的生长状态,生长曲线的方法观察其生长规律;采用MTT方法探讨其对肺癌PG细胞的干预作用及合适的浓度和时间:采用Transwell法探讨其对肺癌PG细胞的侵袭、运动的作用;采用流式细胞仪探讨其对肺癌PG细胞HLA-ABC的作用;采用免疫荧光法探讨其对肺癌PG细胞CK18、LN-R、CD44v6蛋白的表达;采用实时荧光定量法探讨其对肺癌PG细胞C-myc、nm23-H1、Tiam-1基因的表达。
结果:肺癌PG细胞的生长观察:在第一天时细胞成贴壁生长,细胞形状为圆形,核浆及核仁均较大;第三天细胞呈现多角形、梭行等并开始增值;第四天进入对数生长期;第七进入缓慢生长期,细胞密度过大时可呈重叠生长。MTT法显示不同治则中药复方对肺癌PG细胞起抑制作用,随着时间越长,浓度越大,抑制作用越强,扶正祛邪组的作用较强,同浓度与扶正组和祛邪组相比具有统计学差异(P<0.05),同浓度扶正组和祛邪组相比无统计学差异(P>0.05)。侵袭实验结果显示:各组给药血清均可一定程度上抑制肺癌PG细胞的穿膜能力,其中扶正祛邪组较强,同浓度与扶正组和空白组比较有统计学差异(P<0.05),同浓度扶正组和祛邪组之间相比无统计学差异(p>0.05)。运动试验与侵袭实验得出的结果相同。流式法得出的实验结果显示扶正祛邪组最能上调HLA-ABC的表达,同浓度相比其顺序为扶正祛邪组>扶正组>祛邪组,祛邪组下调HLA-ABC的表达,并且扶正祛邪组与其它组相比有明显的统计学差异(P<0.05)。免疫荧光法实验结果显示各组与空白组相比均能下调CD44v6、LN-R、CK18蛋白的表达,浓度之间的差异为:高浓度>中浓度>低浓度,其中扶正祛邪组下调最显著,同浓度与扶正组、祛邪组相比具有统计学差异(P<0.05)。实时荧光定量实验结果显示各组中药复方均能下调肺癌PG细胞Tiam-1的表达,其中扶正祛邪组及祛邪组与空白组相比无统计学差异(P>0.05);均能下调肺癌PG细胞C-myc的表达,但是与空白组相比无统计学差异(P>0.05);均能上调肺癌PG细胞nm23-H1的表达,但是与空白组相比无统计学差异(P>0.05)。
结论:不同治则中药复方对肺癌PG细胞的增殖有不同程度的抑制作用,并显示出时间浓度依赖性,并且通过模拟方法证实了中药各组均能抑制肺癌PG细胞的侵袭转移。具体可能与以下几个方面有关:(1)能够上调HLA-ABC抗原的表达:(2)能够下调CD44v6、LN-R、CK18蛋白的表达;(3)能够下调促癌基因C-myc、Tiam-1及上调抑癌基因nm23-H1的表达。