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目的:探讨m TOR/p70s6K信号通路在人肾小球系膜细胞中的表达;阐明活性维生素D3在肾小球系膜细胞中对m TOR/p70s6K信号通路的调控作用,为临床上使用活性维生素D3治疗慢性肾脏病提供坚实的理论基础。方法:体外培养人肾小球系膜细胞,取传代培养至3-7代细胞分为4组:正常对照组(加含5%胎牛血清DMEM培养基),VD3组(加10-8mol/L 1,25(OH)2D3),雷帕霉素组(加5μg/m L雷帕霉素),VD3+雷帕霉素组(加10-8mol/L 1,25(OH)2D3及5μg/m L雷帕霉素),干预48小时。倒置相差显微镜下观察人肾小球系膜细胞形态变化及生长状况,免疫荧光法检测各组系膜细胞中m TOR、p70s6K蛋白的表达,实时荧光定量PCR法(RQ-PCR)检测各组系膜细胞中m TOR m RNA、p70s6K m RNA的表达。结果:(1)各组系膜细胞生长及形态变化:正常对照组系膜细胞胞体呈长梭形、不规则星形或树枝状,胞核居中,圆形或卵圆形,较清晰;VD3及雷帕霉素组,与正常对照组比较,细胞数目有所减少,细胞之间的链接减少,少数细胞胞膜皱缩,细胞体积较对照组变小,细胞核浓缩,部分胞浆浓缩甚至出现空泡,部分细胞漂浮;VD3+雷帕霉素组,与VD3及雷帕霉素组相比,细胞核数目明显减少,胞体长梭形突出或消失。(2)免疫荧光检测各组干预48h后人肾小球系膜细胞中m TOR、p70s6K蛋白的表达,与正常对照组比较,VD3组、雷帕霉素组、VD3+雷帕霉素组系膜细胞中m TOR、p70s6K蛋白表达强度均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与VD3组比较,雷帕霉素组系膜细胞中m TOR、p70s6K蛋白表达强度无明显降低,差异无统计学意义(P>0.05);与VD3、雷帕霉素组比较,VD3+雷帕霉素组系膜细胞中m TOR、p70s6K蛋白表达强度均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)RQ-PCR检测各组干预48h后肾小球系膜细胞中m TOR m RNA、p70s6K m RNA的表达:与正常对照组相比,VD3组、雷帕霉素组、VD3+雷帕霉素组系膜细胞中m TOR m RNA的表达显著降低,p70s6K m RNA表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);与VD3组比较,雷帕霉素组系膜细胞中m TOR m RNA、p70s6K m RNA表达无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);与VD3、雷帕霉素组相比,VD3+雷帕霉素组系膜细胞中m TOR m RNA的表达显著降低,p70s6K m RNA表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)1,25(OH)2D3可显著抑制人肾小球系膜细胞的增殖;(2)m TOR/p70s6K信号通路存在于在人系膜细胞中,1,25(OH)2D3能通过阻滞该通路抑制系膜细胞增殖;(3)1,25(OH)2D3可协同雷帕霉素抑制m TOR/p70s6K信号通路,加强抑制系膜细胞增殖;(4)1,25(OH)2D3很可能是通过调控系膜细胞中相关蛋白翻译过程来影响蛋白表达,进而发挥抑制系膜细胞增殖的作用。