论文部分内容阅读
目的:
肺癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率己位居各种恶性肿瘤之首。同步放化疗是局部晚期非小细胞肺癌的标准治疗，但由于放化疗的相关毒性及耐药的产生等多种因素，肺癌的治疗现状仍不容乐观。因此寻找全新结构和作用机理的高效低毒的抗肿瘤药物是当今肺癌治疗的重要任务之一。本小组既往研究证明细梗香草总皂苷对非小细胞肺癌具有抗癌活性且无明显的毒副作用，因此，本课题拟对细梗香草总皂苷在非小细胞肺癌中的放疗增敏潜能进行探索。
方法:
第一部分：MTS法分析细梗香草总皂苷对非小细胞肺癌(H460、PC-9、H1299)细胞增殖的影响，集落形成实验、流式细胞仪和Hochest33528分别检测细梗香草总皂苷联合放疗后细胞集落形成率和凋亡的情况，Western blot检测细梗香草总皂苷对凋亡相关蛋白的影响。
第二部分：我们首先通过细梗香草总皂苷作用于骨髓瘤基因报告细胞后，采用流式细胞术筛选出可能涉及的DNA损伤修复机制，然后Western blot检测DNA双链损伤修复过程中可能涉及的蛋白分子，同时利用小干扰RNA下调DNA-PKcs的表达后，观察细梗香草总皂苷的放疗增敏作用是否受到影响。另外，还通过免疫组化法检测细梗香草总皂苷对放疗后的肺癌细胞中组蛋白H2AX的持续时间的影响，再次验证细梗香草总皂苷通过抑制DNA损伤修复过程中的非同源末端连接发挥放疗增敏作用。
第三部分本小组采用transwell小室检测细梗香草总皂苷对肺癌细胞转移侵袭能力的影响。
结果:
第一部分：MTS的结果显示细梗香革总皂苷对H460、PC-9、H1299细胞株均有增殖抑制作用，且呈剂量和时间依赖性，同时它还能增强放疗引起的细胞增殖抑制和放疗诱导的细胞凋亡潜能。细梗香草总皂苷(11μg/mL)预处理48h后肺癌细胞株H460、PC-9、H1299的放射增敏比分别为：67±0.22、2.07±0.34、1.43±0.21．在H460细胞中细梗香草浓度4.84±0.13 μg/mL和放疗剂量在4.99±0.05 Gy以下时，联合指数小于1.0，PC-9细胞中细梗香草总皂苷浓度大于0.128±0.012μg/m和放疗剂量大于0.168±0.03Gy时，联合指数也小于1.0，通过放射增敏比大于1.0和联合指数小于1.0可以得出细梗香草总皂苷对放疗具有协同作用。与流式细胞术结果想对应，Western blot的结果表明：细梗香草总皂苷能够上调肺癌细胞株凋亡相关的蛋白表达。
第二部分：我们首先通过流式细胞术筛选骨髓瘤基因报告细胞，得知细梗香草总皂苷抑制DNA损伤修复过程中的非同源末端连接，Western blot检测结果提示细梗香草总皂苷抑制非同源末端连接过程中相关的蛋白的表达水平，紧接着利用小干扰RNA下调DNA-PKcs的表达后，细梗香草总皂苷的放疗增敏作用大大减弱，因此可以得出细梗香草总皂苷通过抑制非同源末端链接的修复能力发挥放疗增敏活性。另外，免疫组化结果表明细梗香草总皂苷预处理后，DNA双链断点附近的组蛋白H2AX的持续时间延长，即DNA双链断裂修复能力下降，再次证实了细梗香草总皂苷的作用机理。
最后本研究还发现细梗香草总皂苷抑制肺癌细胞侵袭转移能力。
结论:
在非小细胞肺癌中细梗香草总皂苷通过抑制DNA损伤修复过程中的非同源末端连接而发挥放疗增敏作用，且抑制肺癌细胞的侵袭转移能力。
肺癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率己位居各种恶性肿瘤之首。同步放化疗是局部晚期非小细胞肺癌的标准治疗，但由于放化疗的相关毒性及耐药的产生等多种因素，肺癌的治疗现状仍不容乐观。因此寻找全新结构和作用机理的高效低毒的抗肿瘤药物是当今肺癌治疗的重要任务之一。本小组既往研究证明细梗香草总皂苷对非小细胞肺癌具有抗癌活性且无明显的毒副作用，因此，本课题拟对细梗香草总皂苷在非小细胞肺癌中的放疗增敏潜能进行探索。
方法:
第一部分：MTS法分析细梗香草总皂苷对非小细胞肺癌(H460、PC-9、H1299)细胞增殖的影响，集落形成实验、流式细胞仪和Hochest33528分别检测细梗香草总皂苷联合放疗后细胞集落形成率和凋亡的情况，Western blot检测细梗香草总皂苷对凋亡相关蛋白的影响。
第二部分：我们首先通过细梗香草总皂苷作用于骨髓瘤基因报告细胞后，采用流式细胞术筛选出可能涉及的DNA损伤修复机制，然后Western blot检测DNA双链损伤修复过程中可能涉及的蛋白分子，同时利用小干扰RNA下调DNA-PKcs的表达后，观察细梗香草总皂苷的放疗增敏作用是否受到影响。另外，还通过免疫组化法检测细梗香草总皂苷对放疗后的肺癌细胞中组蛋白H2AX的持续时间的影响，再次验证细梗香草总皂苷通过抑制DNA损伤修复过程中的非同源末端连接发挥放疗增敏作用。
第三部分本小组采用transwell小室检测细梗香草总皂苷对肺癌细胞转移侵袭能力的影响。
结果:
第一部分：MTS的结果显示细梗香革总皂苷对H460、PC-9、H1299细胞株均有增殖抑制作用，且呈剂量和时间依赖性，同时它还能增强放疗引起的细胞增殖抑制和放疗诱导的细胞凋亡潜能。细梗香草总皂苷(11μg/mL)预处理48h后肺癌细胞株H460、PC-9、H1299的放射增敏比分别为：67±0.22、2.07±0.34、1.43±0.21．在H460细胞中细梗香草浓度4.84±0.13 μg/mL和放疗剂量在4.99±0.05 Gy以下时，联合指数小于1.0，PC-9细胞中细梗香草总皂苷浓度大于0.128±0.012μg/m和放疗剂量大于0.168±0.03Gy时，联合指数也小于1.0，通过放射增敏比大于1.0和联合指数小于1.0可以得出细梗香草总皂苷对放疗具有协同作用。与流式细胞术结果想对应，Western blot的结果表明：细梗香草总皂苷能够上调肺癌细胞株凋亡相关的蛋白表达。
第二部分：我们首先通过流式细胞术筛选骨髓瘤基因报告细胞，得知细梗香草总皂苷抑制DNA损伤修复过程中的非同源末端连接，Western blot检测结果提示细梗香草总皂苷抑制非同源末端连接过程中相关的蛋白的表达水平，紧接着利用小干扰RNA下调DNA-PKcs的表达后，细梗香草总皂苷的放疗增敏作用大大减弱，因此可以得出细梗香草总皂苷通过抑制非同源末端链接的修复能力发挥放疗增敏活性。另外，免疫组化结果表明细梗香草总皂苷预处理后，DNA双链断点附近的组蛋白H2AX的持续时间延长，即DNA双链断裂修复能力下降，再次证实了细梗香草总皂苷的作用机理。
最后本研究还发现细梗香草总皂苷抑制肺癌细胞侵袭转移能力。
结论:
在非小细胞肺癌中细梗香草总皂苷通过抑制DNA损伤修复过程中的非同源末端连接而发挥放疗增敏作用，且抑制肺癌细胞的侵袭转移能力。